梨和杜梨四倍体诱导体系的建立

摘要

本试验以梨砧木杜梨及栽培品种‘新梨7号’为试验材料，通过诱导剂对种子、愈伤组织、茎段和茎尖生长点诱导多倍体的研究，确定了杜梨和‘新梨7号’诱导多倍体的适宜条件，并初步建立了梨和杜梨四倍体诱导体系，通过形态学鉴定法和流式细胞仪鉴定法相结合对疑似多倍体株系进行了鉴定，最终获得了杜梨和‘新梨7号’的多倍体植株。
　　主要研究结果如下:
　　1、秋水仙素和二甲戊乐灵对杜梨种子四倍体诱导效果存在显著差异。二甲戊乐灵在不同处理浓度和处理时间均未诱导出四倍体。而秋水仙素浸泡杜梨种子诱导四倍体最适条件为:浓度0.4％浸泡24h，诱导率为6.67％，且无嵌合体植株。相对秋水仙素，二甲戊乐灵诱导效果不明显且对植株毒害较大，最终试验选择秋水仙素作为诱导剂。
　　2、秋水仙素浸渍法对杜梨和‘新梨7号’茎段诱导效果不同。杜梨茎段浸泡后污染率普遍高于‘新梨7号’，且诱导率低于‘新梨7号’。当0.2％的秋水仙素溶液浸泡杜梨茎段48h，死亡率达40.00％，污染率为0，诱导率达6.67％，诱导率显著高于其他处理浓度和时间。而‘新梨7号’则表现出不同的诱变规律，0.6％的秋水仙素溶液浸泡72h和0.2％的溶液浸泡24h，诱导率均达到13.00％，但前者的死亡率高达80.00％，污染率为50.00％，均显著高于后者（死亡率10.00％，污染率0％）。综合诱导率、死亡率和污染率等指标，‘新梨7号’最佳诱导条件是0.2％的秋水仙素溶液浸泡24h。
　　3、秋水仙素混培法对杜梨和‘新梨7号’茎段诱导效果存在差异。杜梨诱导四倍体增殖培养基:1/2MS+6-BA1.5mg·L-1+IBA0.1mg·L-1+蔗糖30g·L-1+琼脂6g·L-1+秋水仙素100mg·L-1，‘新梨7号’诱导四倍体增殖培养基:1/2MS+6-BA1.5mg·L-1+IBA0.1mg·L-1+蔗糖30g/L+琼脂6g/L+秋水仙素50mg·L-1，培养30d后，转入不含秋水仙素培养基中培养，最终进行流式细胞仪鉴定。杜梨诱导率为20.00％，且无嵌合体植株。‘新梨7号’诱导率达13.00％，嵌合体植株占诱导植株50.00％。
　　4、秋水仙素涂抹法处理杜梨茎尖生长点，用0.4％的秋水仙素溶液处理茎尖24h时诱导率为6.67％，相对其他处理效果呈极显著差异。并且随着浓度的升高发芽率和成苗率呈逐渐下降的趋势。
　　5、杜梨和‘新梨7号’四倍体诱导最适方法为秋水仙素混培法。
　　6、共获得39株多倍体植株，其中杜梨纯合四倍体10株、嵌合体4株。‘新梨7号’纯合四倍体10株、嵌合体15株。
　　7、杜梨和‘新梨7号’四倍体植株与二倍体植株相比，具有株高变矮，节间变短等性状。

目录

声明

摘要

1引言

1．1多倍体育种研究进展

1．1．1植物多倍体的产生途径

1．2多倍体植物的特点

1．2．1多倍体植物生物学性状的变化

1．2．2多倍体植物的生长发育和生理特性发生变化

1．2．3多倍体植物的适应性和抗逆性增强

1．2．4多数种类的育性降低

1．3多倍体主要诱导途径的研究

1．3．1物理诱导

1．3．2化学诱导

1．3．3胚乳培养法

1．4多倍体主要鉴定方法

1．4．1形态学鉴定

1．4．2细胞学鉴定

1．4．3流式细胞仪鉴定

1．4．4分子水平鉴定

1．5研究意义

2．1供试材料及试验地点

2．2试验方法

2．2．1多倍体诱导试验

2．2．2多倍体的前期筛选

2．2．3多倍体鉴定

2．2．4植株发育特性比较

2．2．5评价指标和计算方法

3结果与分析

3．1不同诱导剂对杜梨种子诱导多倍体的影响

3．2组培条件下秋水仙素对杜梨和‘新梨7号’诱导多倍体的影响

3．2．1秋水仙素溶液对植株生长状态的影响

3．2．2秋水仙素浸渍法对杜梨和‘新梨7号’茎段诱导多倍体的影响

3．2．3秋水仙素混培法对杜梨和‘新梨7号’茎段诱导多倍体的影响

3．3田间条件下秋水仙素对杜梨和‘新梨7号’诱导多倍体的影响

3．3．1秋水仙素涂抹法对杜梨和‘新梨7号’愈伤组织诱导和芽再生的影响

3．3．2秋水仙素涂抹法对杜梨茎尖生长点的诱导效果

3．4二倍体与四倍体生长指标的差异

3．5多倍体的鉴定

3．5．1形态学鉴定

3．5．2流式细胞仪鉴定

4讨论

4．1秋水仙素诱变方法和诱变材料对诱导多倍体的影响

4．2秋水仙素处理浓度与处理时间对诱变率的影响

4．3染色体加倍与形态指数的关系

4．4杜梨和‘新梨7号’多倍体材料的鉴定和植株嵌合体问题

4．5存在的问题与研究展望

5结论

参考文献

附图

作者简介

致谢