应用定量蛋白组学技术筛选不同生存期食管癌患者血清差异蛋白

摘要

背景: 食管癌具有极强的“中国特色”，仍是我国与肿瘤相关死亡的主要原因，呈明显地域性分布。预后极差，5年生存率只有15％左右。目前，食管癌临床预后评价仍以TNM分期为标准。然而，大规模流行病学调查时发现一些肿瘤组织分期与预后不一致的病例，即属于同一TNM分期患者具有不同的预后。这些提示，单纯使用形态学改变作为判断预后的指标存在一定的局限性。因此，寻找与食管癌预后相关预后评价分子指标具有重要的理论意义。 目的:筛选与食管癌生存期相关的差异表达蛋白，为指导临床治疗和判断预后风险提供参考。 方法: 1.收集食管癌患者的术前血清标本及临床病理资料，并跟踪随访，明确患者术后生存时间，随访时间截止到2013年10月。根据生存期进行分组:生存期＜3年组;3年≤生存期≤5年组;生存期＞5年组。每组随机筛选10例血清样品，同时收集正常对照组血清10例。 2.去除血清中的高丰度蛋白质，进行8标同位素相对和绝对定量标记（iTRAQ），之后联合液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)进行分析得到多肽片段定量信息。 3.多肽质谱分析结果经Mascot2.2软件查库及Proteome Discoverer1.3软件分析，得到蛋白的定性信息以及其在各组的相对定量。 4.四组样品进行单因素方差分析，采用生物信息学对显著差异表达蛋白进行分类注释。通过EMBI-EBI蛋白质数据库获取详细蛋白质信息，筛选出与生存期相关的候选蛋白。 结果: 1.在食管癌不同生存期患者血清中经质谱分析查库搜索共鉴定出556种蛋白，具有明显表达差异的蛋白253种(P＜0.05)。 2.鉴定的556种蛋白分别参与18种生物学过程:蛋白代谢、刺激反应、分子转运、细胞转化等;参与17种细胞组成，如:细胞外基质、细胞膜、细胞质、细胞器、细胞核等;共有14种分子功能，包括蛋白结合、金属离子结合、酶活性调节、核苷酸结合等。 3.以正常对照组为参照，在食管癌患者血清中有52种蛋白与食管癌生存期呈正相关，如载脂蛋白D、a-2巨球蛋白随生存期延长其表达明显上调;与生存期呈负相关的蛋白有48种，如血管紧张肽原、碳酸酐酶Ⅱ随生存期延长其表达明显下降。 结论: 本研究提示应用iTRAQ技术寻找食管癌血清肿瘤标记物具有较好的应用前景，血管紧张肽原、碳酸酐酶Ⅱ、载脂蛋白D、a-2巨球蛋白有可能作为食管癌判断预后风险的生物标记。

目录

声明

摘要

前言

1 材料与方法

2 结果

3 讨论

4 小结

5 今后研究方向

参考文献

综述 iTRAQ技术在消化系统肿瘤中的应用

附录A 符号说明

附表B

附录C

附录D

攻读学位期间发表文章情况

致谢

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