血浆miR--320、miR--let--7e和miR--21作为视网膜母细胞瘤早期诊断标志物的研究

摘要

背景:视网膜母细胞瘤(Retinoblastoma，RB)是婴幼儿最常见的眼内恶性肿瘤，全球每年新增RB患儿多达9000例。目前发达国家RB的生存率已超过90％，而我国仅为55％。造成这一差异的原因主要是发展中国家对RB的早期诊断相对滞后，不少数RB患儿被确诊时肿瘤多已侵犯眼眶或颅内，而在医疗水平先进的发达国家，当肿瘤局限在眼球内时疾病便可确诊。因此，寻找一种方便、快捷，灵敏且特异的分子生物学指标对提高我国RB患儿的早期诊断率，挽救患儿生命至关重要。 目的:本文通过实时定量PCR(real-time PCR，RT-PCR)方法检测候选miRNA分子（miR-373、miR-503、miR-320、miR-let-7e、miR-492、miR-498和miR-21）在视网膜母细胞瘤（RB）患者和健康对照者血浆样本中的表达水平，验证并获得在RB血浆中表达异常的miRNA，探讨其与RB患者临床特征之间的关系，并分析其作为RB早期诊断分子标志物的临床价值。 方法：(1)收集15例初治的RB患者和15例健康对照者的血浆样本，通过实时定量PCR技术，检测7个候选的miRNA分子(miR-373、miR-503、miR-320、miR-let-7e、miR-492、miR-498和miR-21)在观察组和对照组中的表达水平，筛选表达异常的miRNA。(2)在新收集的50例初治RB患者和50例健康对照者的血浆样本中，验证初筛的miRNA分子在两组中的表达差异。(3)建立受试者工作特征曲线（ROC曲线）并比较曲线下面积（AUC值），分析血浆miRNA及其联合神经元特异性烯醇化酶(NSE)作为RB诊断指标的有效性。并结合患者的临床资料，揭示血浆miRNA与RB患者临床特征之间的关系。 结果：(1)7个候选miRNA分子中，miR-320、miR-let-7e和miR-21在15例RB患者血浆中的表达水平较15例健康对照者降低（P值分别为: P＜0.001，P=0.0564，P=0.0475）。(2)验证miR-320、miR-let-7e和miR-21在新收集的50例RB患者和50例健康对照者血浆中的表达水平后发现，miR-320、miR-let-7e和miR-21在RB血浆中的表达均呈下降趋势，其中miR-320在RB患几和健康对照者中的差异表达具有统计学意义（P＜0.01）。(3)血浆miR-320、miR-let-7e和miR-21在不同年龄、性别、肿瘤分期、单双眼发病的RB患者之间的表达无统计学差异。(4) miR-320、miR-let-7e和miR-21的曲线下面积（AUC值）分别为0.660(95％CI:0.558-0.752，P=0.0036)、0.587(95％CI:0.484-0.684,P=0.1280)和0.548(95％CI:0.446-0.648，P=0.4100),敏感性分别为58％、76％、46％，特异性分别为74％、42％、72％; miR-320、miR-let-7e和miR-21分别联合NSE的曲线下面积(AUC值)分别为0.996(95％CI:0.957-1.000，P＜0.0001)、0.991(95％CI:0.948-1.000,P＜0.0001)和0.993(95％CI:0.950-1.000,P＜0.0001)，敏感性分别为98％、94％、94％，特异性分别为98％、100％、100％。 结论：(1) miR-320、miR-let-7e和miR-21在RB患者血浆中的表达均呈降低趋势，其中以miR-320的低表达最为显著，提示miR-320、miR-let-7e和miR-21可能参与了RB的发生发展。(2) miR-320、miR-let-7e和miR-21在不同年龄、性别、单双眼发病及肿瘤分期的RB患者血浆中的表达无统计学差异，提示它们可能在RB早期形成过程中起一定作用。(3)血浆miR-320、miR-let-7e和miR-21中，以miR-320的曲线下面积最大，并且又以miR-320联合NSE具有更大的曲线下面积(AUC值)，提示其有望成为RB新的筛查指标。

目录

声明

摘要

前言

第一章 材料与方法

第一节 实验材料

第二节 实验方法

第二章 实验结果

1 受试对象的临床资料与特征

2 血浆miRNA的初步筛选

3 血浆miRNA的进一步验证

4 血浆miRNA作为RB临床诊断标志物的价值

5 血浆miRNA表达和临床特征的关系

第三章 讨论

第四章 小结

参考文献

综述 miRNA与儿童实体瘤

附录 缩略词表

攻读学位期间发表文章情况

致谢

个人简历