基于NMDA受体治疗缺血性脑卒中的药物组合的初步研究

摘要

脑缺血是一种死亡率高、致残率高的常见病，脑缺血后NMDA受体的过度活化在神经元死亡中起重要作用。尽管研究人员已开发了多种NMDA受体拮抗剂，但均由于疗效不确切或不良反应严重而止步于临床试验。本课题主要考察两类拮抗剂组合:非竞争性拮抗剂组合（GluN2A和GluN2B拮抗剂）及竞争性拮抗剂组合（谷氨酸和甘氨酸位点拮抗剂）对脑缺血的作用，旨在判断能否通过使用拮抗剂组合来提高脑缺血治疗效果。 本课题首先对切片工艺进行考察，建立了一套获得完整海马脑片的方法;其次对NMDA浓度进行考察，建立了急性海马脑片、培养海马脑片及海马神经元兴奋性毒性模型;最后，采用LDH测定和PI染色法，检测非竞争性拮抗剂组合:TCN-201+Ro25-6981、TCN-201+ifenprodil和竞争性拮抗剂组合:D-APV+CGP78608对NMDA兴奋性毒性损伤的抑制作用。 结果表明，非竞争性拮抗剂组合能显著降低P7SD鼠急性海马脑片中NMDA诱导的LDH释放量和PI染色水平(P＜0.05)，而在P14、P21大鼠海马脑片中未显示出保护作用（P＞0.05)。非竞争性拮抗剂组合在培养海马脑片和海马神经元的实验中显示出类似的趋势，能显著降低培养至7d、14d海马脑片及7d海马神经元中NMDA诱导的损伤(P＜0.05)，对培养至21d的海马脑片及14d的神经元无保护作用(P＞0.05)。竞争性拮抗剂组合的实验结果显示，单独给药对急性海马脑片、培养海马脑片以及海马神经元NMDA兴奋性毒性的保护作用与D-APV+CGP78608效果相当，均能显著降低神经元的损伤(P＜0.05)。 由上述实验结果可知，本课题所设计的拮抗剂组合并没有显示出优于单一拮抗剂的治疗效果。虽然未取得理想的疗效，但实验结果验证了以下观点:(1)GluN2A拮抗剂TCN-201能减弱GluN2B拮抗剂的保护作用，GluN2A在脑缺血急性期可能发挥促存活作用;(2)单独使用一种激动剂位点拮抗剂就可能实现对NMDA受体代谢型促死亡信号的阻断。本实验内容对以后开发基于NMDA受体的抗脑缺血药物具有一定的指导意义。