干扰素-α对人神经母细胞瘤(SH-sy5y)抑郁相关基因表达的影响

摘要

干扰素-α是临床上广泛应用的一种抗病毒、抗肿瘤药物，但长疗程应用患者易出现精神抑郁等不良反应，且发病率较高。目前IFN-α引起抑郁症的发病机制尚不确定,中枢单胺类神经递质学说是重要的假说之一，认为大脑中单胺递质水平不足时，大脑细胞之间的信号传递就会出现故障，进而出现抑郁症样行为。有研究报道外周血中adcy3,dgka,fam46a,igsf4a,kiaa1539,marcks,raph1,psme1基因表达的改变与抑郁症有密切关系。故阐明IFN-α引起抑郁症的分子机制，利于其发挥最大疗效。 目的：探讨IFN-α对人神经母细胞瘤中adcy3,dgka,fam46a,igsf4a,kiaa1539,marcks,raph1，psme1基因表达水平的影响。 方法：1.细胞培养：将SH-sy5y细胞悬液加入RPMI1640培养基中（含10%灭活胎牛血清、25mM Hepes、2mM L-谷氨酰胺、100ug/mL链霉素、100U/mL青霉素），放置于37℃、含5%CO2、70%-80%湿度的培养箱中进行培养，每隔两天给细胞换液一次。 2.药物处理：培养的SH-sy5y细胞分为两组：实验组给予浓度为1000IU/ml干扰素α-2b注射液，对照组加入PBS缓冲液，药物刺激16小时。 3.Real Time PCR检测：Trizol法分别提取两组细胞总RNA，并鉴定所提取的RNA质量，反转录合成cDNA，根据已知基因序列设计两端引物，以cDNA为模板进行实时荧光定量PCR，检测两组细胞adcy3,dgka,fam46a,igsf4a,kiaa1539,marcks,raph1，psme1基因表达情况。 4.统计学分析：实验结果用均数±标准差((x)±s)来表示，利用单因素方差分析，独立样本t检验，P＜0.05为差异显著，有统计学意义，GraphPad Prism5软件进行结果分析并制做柱状图。 结果：实时荧光定量PCR结果显示，IFN-α组adcy3,dgka,fam46a,marcks,raph1,psme1基因表达水平与PBS组有显著性差异（P＜0.05），其中adcy3和marcks基因表达水平比PBS组减少，而dgka，fam46a，raph1，psme1基因比PBS组表达增加；igsf4a,kiaa1539基因在两组表达无显著性差异（P＞0.05）。 结论：1.IFN-α刺激能使SH-sy5y细胞adcy3和marcks基因表达水平显著降低；而dgka,fam46a,raph1,psme1基因表达则显著升高。 2.IFN-α对SH-sy5y细胞igsf4a,kiaa1539基因表达无显著影响。

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