河南省濮阳地区X连锁Alport综合征家系早期诊断及临床特点分析

摘要

目的：
　　Alport综合征(Alport syndrome，AS)，又称为眼耳肾综合征，是一种单基因突变导致的疾病。突变的致病基因是COL4A3，COL4A4，COL4A5，COL4A6，它们联合编码Ⅳ型胶原蛋白。临床表现是肾功能障碍，血尿，还可能发生眼部病变和听力障碍[1-2]。X连锁伴性遗传的Alport综合征(X-linked AS，简称XLAS)的发生与COL4A3、COL4A4、COL4A5、COL4A6这4个基因中COL4A5密切相关，在临床上最为常见;患者典型的临床特征是:具有肾功能障碍的家族史、蛋白尿、血尿，还可能伴有眼部病变和听力障碍，但是也会有一部分的患者没有上述症状，而只是表现镜下血尿和尿蛋白升高。早有研究表明，各国Alport综合征患者的疾病表现各不相同，中国国内Alport综合征患者表现出的特点是:蛋白尿的症状较为严重，眼部病变和听力障碍发生的概率较高，患者年龄偏小，相比国外在青少年时期发病的概率更高。因此，不同地区需要使用不同的针对Alport综合征的筛查手段，并综合数据，建立中国国内各地区Alport综合征患者的临床数据库，这对中国Alport综合征的预防、治疗和研究都有着十分重要的意义。
　　Alport综合征早期最常见和主要特征是持续变形性的镜下血尿。目前鉴别和诊断血尿来源最基本和常用的办法是对尿红细胞的形态进行检查，公认的用来判断尿红细胞形态最为经典的方法使用是相差显微镜观察，但是在一些基层医院目前还没有条件做到，因此使用的是简单易操作的普通的光学显微镜镜检和尿常规查的筛查手段，协助早期筛查Alport综合征。临床上主要依靠基因检测诊断Alport综合征，应用肾脏穿刺所得病理结果为基因检测提供方向。但是肾脏穿刺是一种有创检查，多数家属拒绝该项检查。研究表明，皮肤活检进行免疫荧光学检查可替代肾脏穿刺活检所得病理结果为基因测序提供方向。
　　该研究通过光学显微镜镜检和尿常规检查早期发现持续变形性的镜下血尿，追踪家系中成员发病情况，绘制家系图谱，回顾性分析其家系发病特点，尽可能对发病成员行皮肤活检，通过二代基因测序诊断X连锁遗传的Alport综合征，进而为其提供详细的预防及治疗方案。
　　方法：
　　对来本院就诊的有AS相关症状患儿，进行尿常规检查，发现尿液中含有较多红细胞的患儿，在1周内重新进行检查1次到2次，如果再次检查的结果仍然是尿液中含有较多红细胞的患儿，取患儿检查当天早晨起床后第一次排出的尿液，经离心处理后于显微镜下观察，判断离心后的尿液沉渣中红细胞形态。若观察到红细胞的形态改变严重，则可以做出肾性血尿的诊断，需要对患儿的双亲进行尿常规检查和尿液中红细胞形态的检查，如果父母的检查结果也有异常，那么需要对患儿的家系进行调查。对符合X连锁显性遗传肾小球源性血尿家系的先证者，进行血常规、生化、肝肾功能、腹部超声、眼科裂隙灯、高频电测听等检查和家系调查，并对检测到血尿的直系家庭成员进行相应的上述检查。对于具备血尿+肾衰家族史，部分家系家族成员有耳聋或视力异常者，对先证者进行进行皮肤活检，应用免疫荧光学检查Ⅳ型胶原a3～a5链染色，或者COL4A3～A5基因的外显子捕获，第二代测序技术检测COL4A3～5基因突变。
　　结果：
　　通过对来院就诊的患儿进行尿常规检查以及尿液中红细胞形态检查的方法，筛查到了8个肾性血尿患儿，对其父母进行尿常规和红细胞形态检查、调查患儿家系，结果8个家族均符合伴X基因连锁显性血尿的家族。8个家系先证者和其亲属都有皮肤或肾小球基底膜Ⅳ型胶原检测异常，Ⅳ型胶原的分布是连续线性的，染色强度为++++，Ⅳ型胶原蛋白的a5链分布为阴性，其中男性患者的染色强度都为—，但是分别在不同的时间出现肾功能障碍，自14岁～70岁不一;部分家系男性患者在发生肾功能不全前2～10年出现听力下降。女性患者染色强度均为—～++，仅有少数在60岁之后出现肾功能不全，未见明显耳聋及视力下降患者。在其中6个家系检测到COL4A5基因突变，分别为位于Exon23:c.1561G＞A(p.G521S)，Exon26:c.2014G＞A(p.G672S),Exon37:c3319G＞A(p.G1107R),Exon39:c.3479dupC(p.Gly1161Argfs*23);Exon42:c.4023C＞T(p.G1342R)和Exon48:c.4687C＞T(p.R1563X)。c.3479dupC(p.Gly1161Argfs*23)和c.4687C＞T(p.R1563X)家系的患者临床表现较重，男性患者出现肾功能不全在30岁之前;c.4023C＞T(p.G1342R)突变家系患者临床表现最轻;c.1561G＞A(p.G521S)突变家系患者目前30多岁，肾功能正常;而c.2014G＞A(p.G672S)突变家系男性患者临床出现肾功能不全的年龄不足20岁。
　　结论：
　　1、本研究运用两种常规的检查手段，即尿常规检查和利用普通光学显微镜检查尿液中红细胞的形态，可以确诊处于早期的Alport综合征患者并筛查Alport综合征的家系，能够在广大基层医院推广应用，使本地区Alport综合征的临床病理资料得到丰富。2、在本研究对8个X连锁显性遗传的Alport综合征家系的基因检测中，发现了6个COL4A5基因的突变，均是导致X连锁显性遗传的Alport综合征家系临床病变的突变位点，其中有2个是首次进行报道。3、临床尿检有异常的患者，实施皮肤活检或者肾组织Ⅳ型胶原检测在XLAS诊断中具有十分重要意义。

目录

声明

摘要

前言

1 材料

1．1 研究对象

1．2 主要试剂及仪器

2 研究方法

2．1 临床资料的收集

2．2 免疫荧光染色

2．3 二代测序技术检测COL4A3～5基因突变

2．4 诊断标准

3 结果

4 讨论

5 小结

参考文献

综述 Alport综合征的临床表现、诊断与治疗研究进展

攻读学位期间发表文章情况

致谢

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