ATRA对狼疮性肾炎MRL/lpr小鼠模型肾脏结构及功能的影响

摘要

狼疮性肾炎（lupus nephritis，LN）是系统性红斑狼疮（systemic lupus erythematosus，SLE）最常见且最严重的并发症之一，其治疗决定着患者的生活质量和预后。环磷酰胺（cyclophosphamide,CTX）在动物模型和临床治疗中均显示能有效改善和控制LN的进展，被称为治疗LN里程碑式的药物。但因其骨髓抑制、性腺抑制、感染、恶性肿瘤等副作用，使其应用受到一定限制。因此寻找疗效更好或与环磷酰胺疗效相似，又具有良好耐受性的药物是一个重要的研究方向。全反式维甲酸(all-trans retinoic acid,ATRA)目前临床上已经应用于急性早幼粒细胞白血病的治疗，并广泛的运用在甲状腺癌、乳腺癌、小细胞肺癌等实体肿瘤的治疗和预防，是临床上常用的分化诱导剂。但是经Medline检索尚未见有关治疗LN的临床报道，也没有与治疗LN的经典药物环磷酰胺做疗效对比的报道。近年来，维甲酸在许多肾脏病动物模型中表现出较好的免疫调节和肾脏保护作用，ATRA有阻碍肾脏纤维化，减轻肾小球肥大，保护肾脏功能等作用。随着许多研究的进展，维甲酸可能成为肾脏病治疗的新方法，为LN的预防和治疗提供了新思路。 目的:观察环磷酰胺和全反式维甲酸在狼疮性肾炎小鼠模型MRL/lpr使用后，小鼠血抗dsDNA抗体(dsDNA)、血清肌酐(Scr)、血尿素氮(BUN)、血浆谷丙转氨酶(ALT)、血白蛋白(ALB)、尿肌酐(Ucr)、肾脏组织形态学变化及肾脏组织TGF-β1、MCP-1的蛋白及mRNA水平表达情况，对比环磷酰胺和全反式维甲酸在狼疮性肾炎小鼠模型MRL/lpr的治疗效果，探讨环磷酰胺与全反式维甲酸在LN发病过程中的对肾脏结构及功能的保护作用是否存在差异。 方法：将24只MRL/lpr小鼠模型随机分为3组：ATRA干预组、对照组、CTX干预组；其中对照组给予生理盐水（10ml/Kg/d），全反式维甲酸干预组予全反式维甲酸（10mg/Kg/d），均采用灌胃给药方式，给药8周后处死；环磷酰胺干预组腹腔注射环磷酰胺（10mg/Kg/d），连续给药2天。实验结束后采集小鼠血液标本，肾脏标本。全自动生化分析仪检测小鼠血尿素氮（Blood Urea Nitrogen，BUN）、血肌酐（Serum creatinine，Scr），血白蛋白（albumin,ALB），血总蛋白（serum total protein,STP），血浆谷丙转氨酶（Alanine transaminase,ALT），抗双链DNA抗体(Anti-double stranded dna antibody,dsDNA)，过碘酸雪夫染色（Periodic Acid-Schiff stain，PAS）观察肾脏组织结构变化；免疫组织化学法检测小鼠肾脏组织中转化生长因子β1（TGF-β1）和单核细胞趋化蛋白（MCP-1）的蛋白水平表达并使用Image-pro Plus软件对TGF-β1MCP-1在肾脏组织中蛋白水平表达进行半定量分析；实时荧光定量PCR（RT-qPCR）测定各组肾脏组织中TGF-β1、MCP-1的mRNA水平表达情况。采用SPSS19.0软件进行统计分析，所得计量资料结果以均数±标准差（(x)±s）表示。多组间比较采用单因素方差分析，2组间比较采用t检验，检验水准α=0.05。 结果：与对照组比较,ATRA干预组和CTX干预组血BUN、Scr等肾功能指标均下降，比较具有统计学差异（P＜0.05）；血ALT,血ALB,血清dsDNA抗体滴度等指标三组之间无统计学差异。与对照组比较，CTX干预组和ATRA干预组小鼠肾组织中TGF-β1、MCP-1蛋白水平和mRNA水平均显著降低（P＜0.05）。CTX干预组小鼠血BUN、Scr，肾组织中TGF-β1、MCP-1蛋白水平和mRNA水平显著低于ATRA治疗组（P＜0.05）。 结论：1.环磷酰胺（CTX）和全反式维甲酸(ATRA)均可降低LN小鼠BUN、Scr水平，降低肾脏组织TGF-β1、MCP-1蛋白水平和mRNA水平的表达，保护肾功能，延缓小鼠狼疮性肾炎的发展； 2.全反式维甲酸对LN的干预作用较环磷酰胺的干预作用弱； 3.鉴于ATRA临床使用副作用较小，又对LN有明显的干预作用，为应用ATRA治疗LN开辟了良好的临床应用前景。

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