不同虾类超氧化物歧化酶性质比较研究

摘要

本文以日本对虾(Penaeus japonicus)为例探讨了虾类超氧化物歧化酶（SOD）提纯条件。然后分析了日本对虾、克氏原螯虾（Procambarus clarkii）、凡纳滨对虾（Litopenaeus vannamei）SOD酶的性质，并对这三种虾不同组织同工酶进行了对比。超氧化物歧化酶是生物机体中氧代谢功能和免疫功能强弱的重要指标，因此对不同虾类SOD酶的研究为深入研究虾类SOD的生物学理论及免疫学机制提供基础资料，同时也为虾类的健康养殖、疾病防治以及新型药物的开发提供依据。
　　通过实验探讨从日本对虾肌肉组织中分离提纯SOD的条件，摸索到提取SOD匀浆液的pH值为6.5；热处理时的最佳除杂蛋白温度为65℃；选用硫酸铵分级盐析饱和度为70％-90%的效果较佳；柱层析采用pH7.8 DEAE-32纤维素柱，离子强度为10mM磷酸钠缓冲液-1M氯化钠梯度洗脱；根据SOD对乙醇-氯仿的敏感性确定为Cu,Zn-SOD。结果获得较纯的SOD，比活力为488.04，纯化倍数为39.30。
　　在性质研究中发现，钙离子对日本对虾肌肉组织中SOD活性有抑制作用，但抑制程度在测定的浓度范围内不强烈；铜、锌、锰三种金属离子则低浓度起促进作用，高浓度具有明显的抑制作用。钙、铜、锌、锰四种金属离子对克氏原螯虾、凡纳滨对虾肌肉组织中 SOD活性的影响都表现先升后降的趋势，但抑制强度不同。SDS、EDTA对日本对虾、克氏原螯虾都表现出抑制作用，SDS对凡纳滨对虾肌肉中SOD活性起抑制作用，而EDTA对此是促进作用，这可能是由不同来源的蛋白结构不同造成的。
　　SOD的活性在日本对虾、克氏原螯虾、凡纳滨对虾的肌肉、鳃之间差异不明显，而肝胰腺高于其它两种组织，且差异显著。在同种组织不同虾类的比较中发现：肌肉、鳃两种组织中超氧化物歧化酶的活性在三种虾中差异不大，肝胰腺中SOD的活性在三种虾中差异明显。
　　日本对虾肌肉和肝胰腺中都有两条带，鳃有一条带，迁移速率也有不同；克氏原螯虾的三种组织中都是两条带，且迁移速率相近；凡纳滨对虾中则肌肉和鳃各有一条带、肝胰腺表现两条带，带与带之间的迁移速率都不同。同工酶乙醇-氯仿处理后活性染色法表现出的电泳带主要为Cu,Zn-SOD。同工酶的不同可能代表了基因表达的差异。

目录

第1章 绪论

1.1 水生生物体内超氧化物歧化酶研究进展

1.1.1 超氧化物歧化酶提纯及性质研究

1.1.2 超氧化物歧化酶同工酶的研究

1.1.3 疾病对超氧化物歧化酶的影响

1.1.4 环境因子对水生生物超氧化物歧化酶活性的影响

1.1.5 水生生物超氧化物歧化酶研究前景

1.2 本文研究目的及意义

1.3 实验内容

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目录

摘要

Abstract

第2章 实验材料与方法

2.1 实验材料

2.2 实验方法

2.2.1 日本对虾肌肉中 SOD 的提纯

2.2.2 酶活力的测定

2.2.3 蛋白含量的测定

2.2.4 电泳

2.2.5 SOD 活性染色

2.2.6 酶类型的鉴定

2.3 数据分析

2.4 实验仪器

第3章 日本对虾肌肉中超氧化物歧化酶分离纯化初探

3.1 材料与方法

3.1.1 材料

3.1.2 试剂与仪器

3.1.3 方法

3.2 结果

3.2.1 匀浆缓冲液最佳pH 值的选择

3.2.2 热处理去除杂蛋白最佳温度的选择

3.2.3 硫酸铵沉淀去除杂蛋白

3.2.4 柱层析分离条件的选择

3.2.5 酶的纯度和活性鉴定

3.2.6 敏感性试验

3.3 讨论

第4章 不同虾种肌肉中超氧化歧化酶部分理化性质比较

4.1 材料与方法

4.1.1 材料

4.1.2 材料处理方法

4.1.3 理化因子梯度设定

4.1.4 SOD 活性测定

4.1.5 数据处理

4.2 结果

4.2.1 钙离子对 SOD 的影响

4.2.2 铜离子对 SOD 的影响

4.2.3 锌离子对 SOD 的影响

4.2.4 锰离子对 SOD 的影响

4.2.5 SDS 对SOD 的影响

4.2.6 EDTA 对 SOD 的影响

4.3 讨论

第5章 超氧化物歧化酶组织同工酶研究

5.1 材料与方法

5.1.1 材料与药品

5.1.2 材料处理方法

5.1.3 SOD 酶活测定

5.1.4 蛋白含量的测定

5.1.5 电泳

5.1.6 数据处理

5.2 结果

5.2.1 不同虾类不同组织中SOD 活性

5.2.2 SOD 酶的电泳结果

5.3 讨论

5.3.1 不同虾类SOD 酶活性差异

5.3.2 SOD 酶同工酶研究

5.3.3 虾类SOD 同工酶研究

第6章 结语

参考文献

致 谢