雷氏大疣蛛毒素对人肺癌A549细胞株增殖的抑制作用

摘要

天然生物神经毒素的研究对神经生物学、药理学、药物学的研究与发展具有非常重要的意义，目前研究人员利用蜘蛛毒素已经开发出临床新药，在缓解疼痛和治疗心律失常方面都有很好的效果。雷氏大疣蛛（Macrothele raveni）是我国最近发现的一个蜘蛛新种，本文探讨了雷氏大疣蛛毒素（MrT）对人肺癌A549细胞增殖的抑制作用，具有抗肿瘤活性的蛋白组分的分离纯化，为研制开发新型抗肿瘤药物奠定基础。
　　 本实验以人肺癌细胞株A549作为腺源性细胞株代表，用雷氏大疣蛛毒素对其进行体外药敏实验，噻唑蓝MTT法检测结果表明，浓度在2.5-40μg/mL MrT对A549细胞株的增殖具有明显的抑制作用，最高药物敏感浓度为20μg/mL，并且随着雷氏大疣蛛毒素浓度的增加和作用时间的延长，该毒素对A549细胞株增殖的抑制作用逐渐增强，IC50为16μg/mL。
　　 采用反相层析法分离纯化了雷氏大疣蛛毒素，共分离出13个组分，通过MTT法检测，其中组分12（MrT-12）能抑制A549细胞株的增殖，效果显著、稳定性好，且分离峰型单一。A549细胞株经MrT-12处理后，随着浓度的升高和时间的延长，抑制作用明显增强，IC50为4.5μg/mL。MrT-12经DEAE分离后测得具有最高抗癌活性的组分12-3经电泳分析，仍显示两条蛋白条带，其分子量大约在50kD和22kD左右。

目录

文摘

英文文摘

声明

引言

第1章文献综述

1.1动物天然毒素抗肿瘤研究进展

1.1.1以细胞信号转导分子为靶点的抗肿瘤药物

1.1.2新生血管生成抑制剂

1.1.3端粒酶抑制剂

1.1.4反义药物

1.1.5肿瘤耐药逆转剂RRA

1.1.6分化诱导剂

1.1.7导向治疗剂

1.1.8基因治疗

1.2天然抗肿瘤毒素的研究

1.2.1关于蝎毒的研究

1.2.2关于蛇毒的研究

1.2.3关于蟾蜍毒的研究

1.2.4关于蜂毒的研究

1.2.5水蛭毒

1.2.6蜈蚣毒

1.2.7海洋生物毒素

1.3蜘蛛毒素的研究概况

1.3.1蜘蛛毒素的研究进展

1.3.2蜘蛛毒素的特性

1.3.3蜘蛛毒素的应用研究

1.4抗肿瘤药物研究与开发

第2章雷氏大疣蛛毒素抑制人肺癌A549细胞增殖的体外药理学实验

2.1实验材料

2.2主要仪器与试剂

2.2.1主要试剂

2.2.2主要仪器

2.3主要试剂的配制

2.3.1清洁液的配制

2.3.2等渗PBS液

2.3.3 FCS溶液

2.3.4 DMEM培养液

2.3.5 RPMI1640培养液

2.3.6 EDTA溶液

2.3.7 D-Hank's缓冲液

2.3.8胰蛋白酶

2.3.9四甲基偶氮唑盐(MTT)

2.3.10台盼蓝储备液

2.3.11抗生素溶液

2.3.12细胞冻存液

2.3.13器材的无菌化准备

2.4实验方法及步骤

2.4.1肿瘤细胞的体外培养、传代、冻存和复苏

2.4.2台盼蓝拒染法检测雷氏大疣蛛毒素对A549细胞增殖的抑制作用

2.4.3 MTT法测定雷氏大疣蛛毒素对A549细胞增殖的抑制作用

2.4.4统计学处理

2.5实验结果

2.5.1 MTT法测定结果

2.5.2台盼蓝法辅助实验结果

2.6讨论

2.6.1肺癌细胞的研究

2.6.2 MTT法

2.6.3台盼蓝拒染法检测雷氏大疣蛛毒素抗肿瘤活性

第3章雷氏大疣蛛毒素抗癌活性蛋白组分的分离纯化及抗癌活性检测

3.1实验材料

3.2实验仪器

3.3主要试剂和药品

3.3.1色谱分离缓冲液

3.3.2 SDS-PAGE电泳溶液

3.3.3 SDS-PAGE电泳溶液(银染法)

3.4实验方法

3.4.1反相层析法分离雷氏大疣蛛毒素

3.4.2阴离子交换法二次分离反相层析法分离后的有效组分

3.4.3雷氏大疣蛛毒素分离各组分的抗癌活性检测

3.4.4电泳检测

3.5实验结果

3.5.1反向层析法分离雷氏大疣蛛毒素及活性测定

3.5.2 SDS-PAGE电泳

3.5.3离子交换法二次分离有效组分12及其各组分活性测定

3.5.4 SDS-PAGE电泳结果(银染色)

3.6讨论

3.6.1聚丙烯酰胺凝胶电泳

3.6.2离子交换层析法与反相层析法

第4章结论与创新点

参考文献

致谢