黔北麻羊BMP4和BMPR-IB基因克隆表达及其多态性与繁殖性状的关联分析

摘要

本研究以黔北麻羊为研究对象，以BMPR-IB和BMP4为候选基因，对BMPR-IB和BMP4两个基因的多态性进行检测，进一步分析两个基因SNP位点的不同基因型与黔北麻羊繁殖性状的相关性，对单羔组和多羔组黔北麻羊繁殖相关组织中BMPR-IB和BMP4的表达规律进行分析，克隆BMPR-IB和BMP4基因的CDS区，构建PET32a(+)-BMPR-IB/BMP4原核表达载体，采用Western-blot技术检测黔北麻羊BMP4重组蛋白的表达。旨在研究BMPR-IB和BMP4基因对黔北麻羊繁殖性状的影响，进一步认识黔北麻羊繁殖性状的分子遗传基础，研究结果如下。
　　1、BMPR-IB和BMP4基因多态性检测
　　在黔北麻羊和贵州黑山羊BMPR-IB基因外显子9的C40G检测到1个SNP位点，但未检测到BMP4基因存在多态位点。进一步对BMPR-IB基因多态位点不同基因型与繁殖性状进行关联分析，发现不同基因型黔北麻羊个体的产羔数之间存在差异，但在贵州黑山羊的三种基因型间未检测到差异。
　　2、BMPR-IB和BMP4基因在黔北麻羊繁殖相关组织表达量的研究
　　对于BMPR-IB基因，在多羔和单羔组黔北麻羊的垂体、输卵管、子宫、下丘脑、卵巢5个组织中均检测到其mRNA表达，且表达趋势趋于一致，由高到低依次为卵巢、垂体、子宫、下丘脑、输卵管。在卵巢组织，多羔组黔北麻羊BMPR-IB基因mRNA的表达量显著高于单羔组（P﹤0.01），而对于其他组织两组间的差异不显著。
　　对于BMP4基因，在两组黔北麻羊的5个繁殖组织中均检测到BMP4基因mRNA的表达，其中在卵巢组织中的表达量最高，在下丘脑中最低。且在卵巢组织，黔北麻羊单多羔组的BMP4基因的表达量达差异显著水平，多羔组表达量显著高于单羔组（P﹤0.05）。
　　3、黔北麻羊BMPR-IB和BMP4基因CDS区的克隆及原核表达载体构建
　　在黔北麻羊卵巢组织中成功克隆BMPR-IB和BMP4基因CDS区，将回收纯化的两个基因的CDS区构建PET32a(+)-BMPR-IB/BMP4原核表达载体，测序结果表明克隆的两个基因为黔北麻羊的BMPR-IB和BMP4基因。利用Western-blot技术对菌株BL21（DE3）中表达的PET32a(+)-BMP4重组蛋白进行验证，获得了黔北麻羊的BMP4原核表达蛋白。

目录

第一章 文献综述

1世界山羊产业发展概况

2 贵州地方山羊产业发展概况

3 贵州山羊主要品种

4 山羊高繁殖力性能的分子遗传基础

5 本研究的目的和意义

第二章 山羊BMPR-IB和BMP4基因多态性及其与繁殖性状的关联研究

1 材料和方法

2 试验方法

3 结果与分析

4 讨论

第三章 黔北麻羊BMPR-IB和BMP4基因表达规律的研究

1 实验材料

2 试验方法

3 结果与分析

4 讨论

第四章 山羊BMPR-IB和BMP4基因原核表达载体的构建及生物信息学分析

1 材料和方法

2 实验方法

3 结果与分析

4 讨论

第五章 黔北麻羊BMP4基因原核表达

1 材料与方法

2 结果与分析

3 讨论

第六章 小结与展望

1 小结

2 展望

参考文献

致谢

附录

声明