黄芪、水蛭、大黄及其复方影响大鼠MsC产生FN及Bax、Bcl-2的研究

摘要

目的 以黄芪、水蛭、大黄及其复方(黄芪、水蛭、大黄、党参、川芎)具有代表性药物作为研究对象,以系膜细胞增生作为作用的靶点,以在肾脏病发生发展中具有代表性的、学术界公认的分子生物学指标 FN 和凋亡调控基因 Bax、Bcl-2为检测目标。观察黄芪、水蛭、大黄及复方含药血清对脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)诱导下体外培养的大鼠肾小球系膜细胞(Mesangial Cells,MsC)表达纤维连接蛋白(fibronectin,FN) 的强弱,对凋亡调控基因 Bax、Bcl-2 的影响和促进MsC凋亡作用的强弱。
　　方法 在大鼠原代肾小球系膜细胞体外培养的基础上,利用 LPS诱发大鼠肾小球系膜细胞增生的模型。采用 ELISA 法检测黄芪、水蛭、大黄及其复方对 MsC 表达FN的影响,实验中将系膜细胞分为九组：控制组、模型组、对照组、黄芪组、水蛭组、大黄组、雷公藤多甙组,复方组、复方+雷公藤多甙组；采用免疫组化法检测凋亡调控基因 Bax、Bcl-2,并测得凋亡细胞数,实验中将系膜细胞分为七组：对照组、黄芪组、水蛭组、大黄组、雷公藤多甙组,复方组、复方+雷公藤多甙组；并经高效液相色谱检测大鼠血浆中是否含有黄芪、大黄、水蛭、雷公藤多甙片的主要成分毛蕊异黄酮葡萄糖苷、大黄酸和大黄素、次黄嘌呤、雷公藤甲素。
　　结果 在抑制MsC产生FN方面：水蛭组抑制作用强于黄芪组和大黄组,有显著性差异(P<0.05)；大黄组与黄芪组相比,优于黄芪组,有显著性差异；水蛭组与雷公藤多甙组和复方组作用相近,三者比较无显著性差异；复方+雷公藤多甙组作用最佳,与其他各组相比均有显著性差异(P<0.05)。免疫组化法标记MsC的凋亡调控基因Bax、Bcl-2方面：标记出含促凋亡蛋白Bax的细胞率上水蛭组和大黄组明显高于黄芪组,有显著性差别( P<0.0024)；复方组标记出含促凋亡蛋白Bax的细胞率与单味中药组相比,高于单味中药组,有显著性差异( P<0.0024)；以复方+雷公藤多甙组标记出含促凋亡蛋白 Bax 的细胞率最高；而各含药血清组在标记出含抑制凋亡蛋白 Bcl-2的细胞率与Bax大致相反。各含药血清组MsC凋亡率之间的比较：水蛭组和大黄组明显优于黄芪组,有显著性差别( P<0.0024)；复方组与单味中药组相比,均优于单味中药组可明显促进系膜细胞凋亡,有显著性差别(P<0.0024),以复方+雷公藤多甙组作用最佳,与其他各组相比均有显著性差异(P<0.0024)。经高效液相色谱测定大鼠血浆中含有黄芪、大黄、水蛭、雷公藤多甙片的主要成分毛蕊异黄酮葡萄糖苷、大黄酸和大黄素、次黄嘌呤、雷公 藤甲素。
　　结论 各含药血清组均能明显降低经LPS刺激后体外培养的大鼠MsC产生FN的含量,以复方+雷公藤多甙组作用最佳,水蛭组抑制作用较强,优于黄芪组；在促进大鼠 MsC凋亡方面,仍以复方+雷公藤多甙组作用最佳,水蛭组和大黄组作用较强,优于黄芪组。得出活血化瘀水蛭在抑制系膜细胞增生,促进系膜细胞凋亡方面效果优于益气类中药黄芪,也间接说明治疗系膜增生性肾小球肾炎以复方+雷公藤多甙效果最优。

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前言

实验一黄芪、水蛭、大黄及其复方的含药血清影响大鼠MsC产生FN的研究

1 材料

2 实验方法

3 结果

实验二黄芪、水蛭、大黄及其复方的含药血清对大鼠MsC凋亡调控基因Bax、Bcl-2的影响及形态学研究

1 材料

2 实验方法

3 结果

实验三黄芪、大黄、水蛭及雷公藤多苷片血清药物化学实验

1 材料

2 实验方法与结果

实验结果分析及理论探讨

1 黄芪、水蛭、大黄及其复方的含药血清影响大鼠MsC产生 FN的研究

2 黄芪、水蛭、大黄及其复方的含药血清对大鼠 MsC 凋亡调控基因 Bax、Bcl-2的影响及形态学研究

3 黄芪、大黄、水蛭及雷公藤多苷片血清药物化学实验

4 中医理论探讨

5 西医理论探讨

6 黄芪、水蛭、大黄及雷公藤的现代研究

7 导师翟文生教授对系膜增生性肾小球肾炎的认识

结论

致谢

参考文献

附录

附录1病理图片

附录2文献综述

附 录3在校期间论文论著及科研情况