γ分泌酶抑制剂阻断Notch信号通路对肺腺癌细胞A549增殖的影响

摘要

背景：在全世界，肺癌在恶性肿瘤死因中占第一位。积极研究肺癌的发病机制，寻求新的治疗方法，尤为迫切。近来，Notch信号通路与肺癌之间的关系受到关注。目前，多认为Notch1、Notch3蛋白在非小细胞肺癌组织中表达比较常见，低氧条件下，Notch1信号可促进非小细胞肺癌增殖及存活。肺腺癌是非小细胞肺癌中的一种常见病理类型，Notch1-4各亚型在肺腺癌细胞上的表达情况还不明确，Notch1信号通路在正常氧条件下对肺腺癌细胞增殖是否有影响，有待进一步研究。
　　目的：检测Notch1-4各亚型在肺腺癌细胞A549上的表达情况，并通过γ分泌酶抑制剂MW167阻断Notch受体蛋白在A549细胞上活化，观察MW167在正常氧条件下对A549细胞增殖的影响。探讨Notch1信号通路在正常氧条件下对肺腺癌A549增殖的影响，围绕Notch1信号通路，为肺腺癌的防治提供理论依据。
　　方法：体外培养人肺腺癌细胞A549，通过Western-blot及RT-PCR方法检测Notch受体各亚型表达情况；在正常氧条件下，不同浓度（5μM、10μM、20μM）MW167处理肺腺癌细胞A549，48小时后，通过Western-blot方法检测Notch1蛋白表达的变化；不同浓度（5μM、10μM、20μM）MW167处理肺腺癌细胞A549，48小时后，通过RT-PCR方法检测Notch信号通路下游基因HES1 mRNA表达的变化；不同浓度（5μM、10μM、20μM）MW167处理肺腺癌细胞A549，48小时后，应用MTT法检测MW167对细胞增殖的影响。实验数据应用SPSS17.0统计分析软件处理。
　　结果：通过Western-blot方法及RT-PCR方法证实Notch1-4各亚型在A549细胞均有表达。在正常氧条件下，不同浓度（5μM、10μM、20μM）MW167处理肺腺癌细胞A549，48小时后，各加药组与对照组相比，Notch1蛋白表达升高（P<0.05），随着MW167浓度增加，Notch1蛋白积累增加率没有明显相应增加（r=0.2，P>0.05）；不同浓度（5μM、10μM、20μM）MW167处理肺腺癌细胞A549，48小时后，各加药组与对照组相比，HES1 mRNA表达下降（P<0.05），随MW167浓度增加，对HES1 mRNA表达的抑制率逐渐增加（r=0.927，P<0.01）；不同浓度（5μM、10μM、20μM）MW167处理肺腺癌细胞A549，48小时后，MTT法检测各加药组吸光度A值比对照组高（P<0.05），随浓度增加，增值率相应增加（r=0.904，p<0.01）。结论：1．Notch受体各亚型在肺腺癌A549细胞中均有表达，为进一步研究Notch信号通路与肺腺癌A549的关系提供前提。
　　2．在正常氧条件下，不同浓度（5μM、10μM、20μM）MW167处理肺腺癌细胞A549，48小时后，Notch1蛋白表达增加，而下游基因HES1 mRNA表达减少，说明MW167不同程度阻断Notch1蛋白酶切活化，使Notch1蛋白积累，表达增加，而下游基因HES1表达受抑制。
　　3．在正常氧条件下，γ分泌酶抑制剂MW167可阻断Notch信号通路，并对肺腺癌细胞A549有一定促增殖作用，随MW167浓度增加，促增殖作用增强。由于这种作用与部分阻断 Notch1受体蛋白活化有关。因此推测，正常氧浓度条件下， Notch1信号通路可能对肺腺癌A549细胞起抑制作用。

目录

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引言

1.Notch 信号通路 组成及激活

2. Notch 信号 通路与肺癌

3.γ-分泌酶及其 抑制剂

1 Notch受体各亚型在肺腺癌A549细胞中的表达检测

1.1 前言

1.2 材料和试剂

1.3 方法

1.4 结果

1.5 讨论

2.MW167阻断Notch信号通路对肺腺癌细胞A549增殖的影响

2.1前言

2.2 材料和试剂

2.3方法

2.4 结果

2.5 讨论

3. 结论

参考文献

致谢

附录A英文缩写一览表

附录B 主要试剂配制方法

附录C个人简历

附录D 论著: Notch1蛋白在人肺腺癌组织中的表达及意义

附录E 文献综述: Notch信号通路与肺癌关系的研究进展