hBMP-2真核表达载体的构建及转染兔骨髓间充质干细胞的研究

摘要

目的：(1)克隆人骨形成蛋白-2(hBMP2)基因片段，构建pcDNA3.1-hBMP2真核表达质粒。(2)检测其在兔骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymalstem cells，BMSCs)中的表达。 方法：(1)采用逆转录聚合酶链式反应(RF-PCR)技术，从人骨肉瘤中扩增出人骨形成蛋白-2基因片段，通过DNA重组技术将该基因片段重组于pcDNA 3.1真核表达载体上，构建成pcDNA3.1-hBMP2重组质粒。(2)通过用PCR扩增、酶切电泳分析及DNA测序的方法对重组DNA进行鉴定。(3)转染兔骨髓间充质干细胞并通过RT-PCR和免疫组化检测其在兔骨髓间充质干细胞中的表达。 结果：(1)经PCR扩增、酶切电泳分析和DNA测序证实，本实验构建的重组质粒目的基因片段为人BMP2-cDNA。(2)经RT-PCR和免疫组化证实，转染pcDNA3.1-hBMP2后的兔骨髓间充质干细胞内有大量hBMP2 mRNA的转录和蛋白的表达，而未转染的骨髓间充质干细胞未见阳性表达。 结论：(1)本实验成功构建hBMP2真核表达质粒并在骨髓间充质干细胞中得到表达。(2)本研究为进一步研究用BMP2基因转染的方法来加速牵张成骨新骨形成的实验奠定了基础。

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综述 基因治疗在牵张成骨中的应用前景

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