hBMP-2基因转染兔骨髓间充质干细胞体内移植后hBMP-2的活性检测

摘要

目的 探究人骨形态发生蛋白-2(human bone morphogenetic protein-2,hBMP-2)基因植入兔股骨头坏死模型体内后的活性,为后续实验奠定理论基础.方法 1.采用髓芯减压联合液氮冰冻法制备兔股骨头坏死模型;2.将造模成功的兔子随机分为A、B、C3组(n=12),A组不植入材料,为对照组,B、C组分别植入DBM/BMSCs、hBMP-2/BMSCs/DBM;3.术后第1、第2、第3周各组分别处死4只兔子,分别运用PCR、RTFQ-PCR、Western Blot检测股骨头内hBMP-2基因和蛋白的表达量,评估hBMP-2基因在兔体内的活性.结果 植入后,在第1、第2、第3周,PCR结果示:A、B两组hBMP-2基因呈阴性表达,C组hBMP-2基因呈阳性表达;RTFQ-PCR示:C组相对表达量分别为1,0.947±0.025,0.895±0.059,P=0.081;Western blot示:A、B两组hBMP-2蛋白在兔体内呈阴性表达,C组hBMP-2蛋白呈阳性表达;凝胶成像系统分析显示:C组hBMP-2蛋白表达灰度值(目的/内参)分别为:0.530±0.056、0.507±0.066、0.475±0.086,且两两之间比较P＞0.05.结论 hBMP-2基因转染BMSCs植入兔股骨头坏死模型体内后能够稳定表达,进而能够持续诱导BMSCs向骨细胞分化,达到修复股骨头坏死的目的.