Cedemex抗大鼠吗啡依赖性的作用及其机制研究

摘要

吗啡依赖性的产生是一个非常错综复杂的过程，牵涉阿片受体、神经递质(neurotransmitter，NT)、神经肽(neuropeptide)、细胞内信号转导、离子通道(ion channel，IC)、神经核(nucleus，Nu)与神经回路(neural circuit，NC)、学习记忆和奖赏机制等许多方面。目前，阿片类药物成瘾的研究主要集中于阿片受体、阿片肽系统及其它们通过各种复杂的神经体液机制对体内相关神经递质的调节作用，另外，受体后信息传导的改变也成为当今的一个研究热点。Cedemex为一种草药制剂，在越南临床应用表明对阿片类依赖性有良好的脱毒和抗复吸作用。本课题拟在整体、器官、细胞、分子及基因水平上深入研究Cedemex抗吗啡依赖性作用及其作用机制，为新药开发和临床治疗提供理论基础。 目的：探讨Cedemex抗药物依赖的作用及其机制。 方法：(1)建立7天的吗啡依赖大鼠催促戒断模型，观察Cedemex对吗啡依赖大鼠催促戒断行为学的影响(包括Cedemex对催促戒断吗啡依赖大鼠戒断症状的干预及治疗作用)；(2)制备吗啡依赖离体豚鼠回肠模型，观察Cedemex对吗啡依赖离体豚鼠回肠收缩张力的影响；(3)采用光镜和电镜观察Cedemex对吗啡依赖大鼠不同脑区即大脑腹侧被盖(VTA)、下丘脑(Hth)、海马(HIP)神经组织的形态学变化；(4)采用反相高效液相色谱法(RP-HPLC)测定吗啡依赖大鼠不同部位脑组织即四个脑区(Acc、VTA、HIP、CC)的单胺类递质含量变化；(5)采用放射免疫技术测定吗啡依赖大鼠不同部位脑组织(下丘脑和垂体)的内啡肽、cAMP和cGMP的含量；(6)采用RT-PCR和荧光定量PCR技术测定大鼠不同部位脑组织(下丘脑和垂体)的POMC(阿黑皮素)基因的表达、下丘脑D<,2>受体基因的表达和CREB基因的表达。 结果：(1)Cedemex能够明显降低吗啡依赖成瘾大鼠催促戒断症状分值(P<0.05)(停用吗啡组70.25±10.27，Cedemex高剂量组51.63±3.33，Cedemex中剂量组52.25±5.33，Cedemex低剂量组53.00±10.39，阳性对照组1.355±0.483)、明显对抗戒断反应前后的体重减轻(P<0.05)(停用吗啡组2.834+0.588，Cedemex高剂量组1.309+1.305，Cedemex中剂量组1.646±0.379，Cedemex低剂量组1.855±2.482，阳性对照组1.355±0.483)。(2)Cedemex能明显抑制Nax引起的吗啡依赖离体豚鼠回肠收缩张力(p<0.01)(停用吗啡组2.45±0.53，Cedemex高剂量组0.89±0.18，Cedemex中剂量组0.97±0.18，Cedemex低剂量组2.13±0.33，尼莫地平对照组0.96±0.11)及ACh引起的正常离体豚鼠回肠的收缩张力。(3)光镜下除模型组的海马有轻度水肿之外，其余组未见明显异常；电镜下吗啡组与生理盐水组，神经原的凋亡比较明显，Cedemex高剂量组和阳性药物组基本正常，Cedemex中剂量组、Cedemex低剂量组凋亡明显减轻。(4)与停用吗啡组的多巴胺含量比较，Cedemex高剂量组、Cedemex中剂量组和阳性药物对照组的多巴胺含量均有不同程度的下降(p<0.01)(停用吗啡组：VTA3914.96±80.65，海马区4032.07±77.21，皮层区4941.90±82.92，伏隔核4716.03±85.87；Cedemex高剂量组：VTA2426.17±75.49，海马区3453.27±78.80，皮层区3782.13±61.72，伏隔核3252.08±78.97；Cedemex中剂量组：VTA3312.61±66.21，海马区3569.06±76.11，皮层区3806.63±85.01，伏隔核2613.09±77.12；阳性药物对照组：VTA2298.66±77.12，海马区3010.02±71.33，皮层区3611.91±83.61，伏隔核3009.44±80.56)；与停用吗啡组比较，Cedemex高剂量组和阳性药物对照组去甲肾上腺素含量的显著降低(P<0.05)(停用吗啡组：VTA3571.10±73.01，海马区3949.31±97.20，皮层区3844.89±46.11，伏隔核4846.904±74.80；Cedemex高剂量组：VTA4672.83±82.43，海马区3809.46±77.30，3554.914±74.72皮层区，伏隔核3868.41±56.96；阳性药物对照组：VTA3747.35±73.51，海马区3771.20±65.35，皮层区3441.92±51.02，伏隔核4557±264-73.11)；与停用吗啡组相比较，Cedemex高剂量组和阳性药物对照组5-HT含量明显下降，(P<0.01)(停用吗啡组：VTA30.62±0.54，海马区10.25±0.62，皮层区13.41±0-31，伏隔核30.62±0.54；Cedemex高剂量组：VTA22.53±0.75，海马区6.43±0.42，皮层区8.75±0.39，伏隔核7.81±0.43；阳性药物对照组：VTA7.67±0.42，海马区5.86±0.37，皮层区8.76±0.42，伏隔核22.31±0.65)。(5)与停用吗啡组相比，Cedemex各组的cAMP含量明显降低(P<0.05)(停用吗啡组：VTA 12332.17±122.75，皮层区16062.25±754.86，海马区16427.39±667.07)，cGMP含量明显升高(P<0.05)(停用吗啡组：VTA 728.71±11.55，皮层区706.67±16.28，海马区600.43±11.24)，两者均呈明显的剂量相关性。(6)与停用吗啡组比较，Cedemex中、高剂量组的D2RmRNA表达升高(p<0.01)(停用吗啡组：(4.9±0.8)x10<'6>Cedemex，高剂量组：(8.4±0.9)x10<'5>，Cedemex中剂量组：(7.1±1.1)x10<'6>，Cedemex低剂量组：(3.2±0.9)x10<'6>，阳性药物对照组：(7.2±0.7)x10<'6>)。POMCmRNA表达升高(p<0.01)(停用吗啡组：(5.4±1.2)x10<'5>，Cedemex高剂量组：(7.8±0.9)x10<'6>，Cedemex中剂量组：(5.9±0.7)×10<'6>，Cedemex低剂量组：(6.0±0.8)x10<'6>，阳性药物对照组：(2.34±0.4)x10<'6>)。CREBmRNA表达降低(p<0.01)(停用吗啡组：0.23±0.046，Cedemex高剂量组：0.09±0.069，Cedemex中剂量组：0.14±0.077，Cedemex低剂量组：0.16±0.031，阳性药物对照组：0.19±0.068)。 结论：Cedemex能快速对抗吗啡依赖大鼠戒断症状的产生，其机制在外周可能通过影响M受体、μ受体、钙离子内流等发挥作用，在中枢可能通过M受体、μ受体等使脑内单胺类神经递质含量下降，降低cAMP/cGMP值，增加D<,2>受体和POMC表达，减少CREB表达等起作用。

目录

论文说明：本文英文缩略语表

声明

摘要

前言

第一部分 Cedemex对吗啡依赖性大鼠行为学的影响

1材料与方法

2结果

3讨论

4小结

参考文献

第二部分 Cedemex对吗啡依赖性豚鼠离体回肠的影响

1材料与方法

2结果

3讨论

4小结

参考文献

第三部分 Cedemex对吗啡依赖性大鼠神经细胞形态学上的影响

1材料与方法

2结果

3讨论

4小结

参考文献

第四部分 Cedemex对吗啡依赖性大鼠不同脑区三种单胺类神经递质的影响

1材料与方法

2结果

3讨论

4小结

参考文献

第五部分 Cedemex对吗啡依赖性大鼠第二信使系统的影响

1材料与方法

2结果

3讨论

4小结

参考文献

第六部分 Cedemex对大鼠吗啡依赖性相关基因表达的影响

1材料与方法

2结果

3讨论

4小结

参考文献

结论

创新和意义

展望

综述 吗啡依赖性机制的研究进展

附录

读博士期间发表的论文

致谢