E2F-1过表达逆转录病毒载体的构建及其对裸鼠人胃癌皮下瘤生长的影响

摘要

第一部分、E2F-1过表达基因逆转录病毒载体的构建及其对人胃癌MGC-803细胞增殖的影响。
　　 目的：通过构建人同源基因E2F-1逆转录病毒表达载体，观察过表达E2F-1基因对胃癌MGC-803细胞增殖的影响。
　　 方法：应用基因重组技术将E2F-1基因克隆到逆转录病毒载体pLXSN中，进行酶切鉴定。重组体和逆转录病毒载体分别感染包装细胞PA317，RT-PCR检测转染效果，收集培养上清后通过感染NIH3T3细胞测定病毒滴度。重组体和逆转录病毒载体分别感染MGC-803细胞，Western bolt和RT-PCR检测感染情况，克隆形成实验、MTT法检测细胞增殖情况。
　　 结果：
　　 (1)pLXSN-E2F-1经酶切鉴定证实与目的片断一致，表明重组体构建成功。
　　 (2)pLXSN-E2F-1重组体经RT-PCR检测证实E2F-1基因正确克隆进pLXSN。
　　 (3)NIH3T3细胞测定病毒滴度为2.4×105；(4)与MGC-803组和MGC-803/PLX组相比，MGC-803/PLX-E2F-1组E2F-1表达明显上调(P＜0.05)。(5)MGC-803/PLX-E2F-1组细胞克隆形成率为48％，明显低于MGC-803组和MGC-803/PLX组MGC-803/PLX-E2F-1组细胞的增殖率为MGC-803组的26.61％，明显慢于MGC-803组和MGC-803/PLX组(P＜0.01)。
　　 结论：成功建立E2F-1基因过表达的逆转录病毒包装细胞PA317，而且pLXSN-E2F-1成功感染MGC-803细胞；E2F-1过表达可抑制MGC-803细胞的增殖。
　　 第二部分、转录因子E2F-1对裸鼠人胃癌细胞移植瘤生长的影响。
　　 目的：观察含有转录因子E2F-1的重组逆转录病毒载体(pLXSN-E2F-1)对裸鼠人胃癌细胞移植瘤E2F-1基因的表达和肿瘤生长的影响。
　　 方法：建立人胃癌MGC-803细胞裸鼠移植肿瘤模型，随机分为pLXSN-E2F-1组，pLXSN组，生理盐水组。隔天向各组分别注射相应药物0.2ml，共7次，同时测量各组肿瘤体积。15天后处死裸鼠，显微镜下观察移植瘤组织形态变化，用免疫组化法、半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot技术检测移植瘤中E2F-1基因的表达，脱氧核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)检测肿瘤细胞凋亡指数。
　　 结果：与生理盐水组和pLXSN组比较，pLXSN-E2F-1组肿瘤生长速度明显减慢(P＜0.05)；病理学观察确认所取组织为恶性肿瘤组织；免疫组化结果显示pLXSN-E2F-1组的肿瘤细胞细胞浆内有较多棕褐色颗粒沉着，pLXSN组和生理盐水组肿瘤细胞细胞浆内均未见或偶见棕褐色颗粒沉着；半定量RT-PCR和Western-blot结果均显示pLXSN-E2F-1组E2F-1表达较pLXSN组和生理盐水组明显上调(P＜0.05)；pLXSN-E2F-1组的凋亡指数(15.4±4.1)％显著高于pLXSN组(8.3±2.2)％和生理盐水组(8.1±2.3)％(P＜0.05)。
　　 结论：逆转录病毒载体pLXSN-E2F-1瘤内注射可抑制人胃癌裸鼠移植瘤的生长。

目录

论文说明：英文缩略词

声明

第一部分E2F-1过表达基因逆转录病毒载体的构建及其对人胃癌MGC-803细胞增殖的影响

摘要

前言

1 材料与方法

2 结果

3.讨论

参考文献

第二部分转录因子E2F-1对裸鼠人胃癌细胞移植瘤生长的影响

摘要

前言

1 材料与方法

2.结果

3.讨论

参考文献

综述部分 胃癌基因治疗的研究现状和展望

致谢

攻读学位期间发表论文