肝癌患者组织及血清中mRNA和miRNA差异性表达分析

摘要

本文主要从以下几部分进行论述：
　　第一部分
　　目的:筛选人肝癌组织及其癌旁正常肝组织差异性表达mRNA并进行生物信息学分析。
　　方法:运用Agilent8x60K基因芯片技术检测人肝癌组织及其癌旁正常肝组织的基因表达谱，利用生物信息学方法对差异性表达基因进行GO和Pathway分析，并采用Real-time PCR技术验证芯片结果。
　　结果:与癌旁正常肝组织相比，肝癌组织差异性表达基因共有2694个，其中上调基因有924个，下调基因有1770个。GO和Pathway分析提示差异性表达基因可能参与转录、氧化还原、信号转导、离子转运、免疫应答、细胞黏附及结合功能等生物过程。Real-time PCR验证结果显示GPC3和CTHRC1在肝癌组织中表现为高表达，而GLS2在肝癌组织中表现为低表达，提示Real-time PCR验证结果与芯片检测结果具有较好一致性。
　　结论:基因芯片筛选出的差异性表达mRNA可能参与信号转导、免疫应答等诸多关键环节，可为肝癌相关特异性标记靶向治疗提供新的思路。
　　第二部分
　　目的:筛选人肝癌组织及其癌旁正常肝组织差异性表达miRNA并进行靶基因预测分析。
　　方法:利用miRNA芯片技术检测人肝癌组织及其癌旁正常肝组织的miRNA表达谱，筛选出差异性表达的miRNA，利用生物信息学软件对差异性表达miRNA进行靶基因预测，并用Real-time PCR技术验证芯片结果。
　　结果:与癌旁正常肝组织相比，肝癌组织差异性表达miRNA共有33个，其中上调miRNA有21个，下调miRNA有12个。利用生物信息学软件对差异性表达miRNA进行靶基因预测并与第一部分的mRNA芯片结果进行比对并取交集后得到了14个与肝癌密切相关且值得关注的miRNA及其靶基因组合。Real-time PCR验证结果显示miR-155与miR-96在肝癌组织中表现为高表达，而miR-99a在肝癌组织中表现为低表达，提示Real-time PCR验证结果与芯片检测结果具有较好一致性。
　　结论:miRNA芯片筛选出的差异性表达miRNA及其靶基因可能参与肝癌侵袭转移等诸多关键环节，针对特异性miRNA及其靶基因的治疗可为肝癌患者靶向治疗开辟新的道路。
　　第三部分
　　目的:检测miR-155、miR-96和miR-99a在肝癌患者血清中表达水平并进行临床资料分析。
　　方法:收集30例肝癌患者及健康对照血清标本，利用Real-time PCR技术检测经过验证的差异性表达miRNA(miR-155、miR-96、miR-99a)的表达水平并进行临床资料分析。
　　结果:利用Real-time PCR技术对miR-155，miR-96和miR-99a在血清中进行表达水平测定后，我们发现miR-155与miR-96的表达水平在肝癌患者血清中显著上调，而miR-99a肝癌患者血清中表达水平显著下调，以上结果与组织中相应miRNA表达水平具有高度一致性。以上差异性表达miRNA与肝癌患者的年龄、性别、肿瘤数量、肿瘤大小、AFP水平、是否伴有肝硬化无明显相关性(P＞0.05)，与TNM分期、分化程度、转移与否有关(P＜0.05)。
　　结论:肝癌患者组织及血清中miR-155、miR-96和miR-99a均呈现差异性表达，这些miRNA与肿瘤分期、肿瘤分化程度、肿瘤是否转移等因素密切相关，可能成为原发性肝癌新的生物学指标。

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中英文缩略词表

摘要

前言

参考文献

第一篇 肝癌组织及其癌旁正常肝组织mRNA差异性表达分析

1、材料与方法

2、结果

3、讨论

参考文献

第二篇 肝癌组织及其癌旁正常肝组织miRNA差异性表达分析

1、材料与方法

2、结果

3、讨论

参考文献

第三篇 肝癌患者血清中miRNA表达水平测定及临床分析

1、材料与方法

2、结果

3、讨论

参考文献

结论

综述 miRNA在肿瘤临床早期诊断中的应用研究进展

致谢

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