益气解毒法对荷瘤裸鼠抑瘤作用和抑制胃癌细胞增殖及诱导凋亡的实验研究

摘要

目的：通过益气解毒法对荷瘤裸鼠抑瘤作用和抑制胃癌细胞增殖及诱导凋亡的实验研究，探寻该方法治疗胃癌的作用机制，以期初步为益气解毒法在胃癌治疗中的临床应用提供理论基础和依据。
　　方法：通过体内外实验观察益气解毒法对胃癌的影响及作用。体外实验将基于益气解毒理论组方的中药进行水提醇沉法工艺制备，制成稳定剂型；体外培养人胃癌细胞株SGC-7901、MGC-803，采用MTT检测法对胃癌细胞株进行药物敏感性检测，根据48h预实验得出胃癌细胞半数抑制浓度IC50，从而确定中药高、中、低剂量组的浓度；通过在倒置相差显微镜下观察细胞形态与细胞活性，应用酶联免疫检测仪测定细胞吸光度OD值，得出细胞抑制率；通过细胞免疫荧光技术来观察细胞内部
　　CyclinD1、Bcl-2、Caspase-3三种蛋白在不同药物浓度影响下的表达；从细胞水平观察益气解毒法对胃癌细胞增殖、凋亡的影响。体内实验通过构建裸小鼠胃原位移植瘤模型，观察益气解毒法对裸小鼠胃原位移植瘤瘤重及荷瘤小鼠体重的影响，并应用免疫组化、Westernblot技术，从分子水平观察益气解毒法对裸小鼠胃原位移植瘤内细胞增殖、凋亡相关蛋白CyclinD1、Bcl-2、Caspase-3表达的影响。
　　结果：体外实验，（1）MTT实验中，实验组与对照组相比差异有统计学意义，说明益气解毒法对胃癌细胞 SGC-7901、MGC-803均有细胞毒作用；中药剂量浓度的高低与胃癌细胞凋亡呈正相关，即中药剂量越高对胃癌细胞的抑制增殖作用越强，细胞的活力越差；（2）免疫荧光实验中，在益气解毒方高、中、低剂量的影响下，CyclinD1、Bcl-2、Caspase-3三种蛋白在胃癌细胞 SGC-7901、MGC-803中的表达与对照组相比差异显著；其中Caspase-3在益气解毒方药物影响下阳性表达率增高，均高于对照组；而 CyclinD1、bcl-2在益气解毒方药物干预作用下阳性表达率降低，且均低于对照组。体内试验，（1）通过对荷瘤裸小鼠体重及瘤重的统计，发现中药实验组的瘤重低于 NS对照组，且差异有统计学意义；（2）在免疫组化和Westernblot实验中，CyclinD1、Bcl-2在中药高、中剂量组的表达量明显低于对照组，Caspase-3在中药高、中剂量组的表达量明显高于对照组，且差异都具有统计学意义。
　　结论：益气解毒方中药与胃癌细胞凋亡密切相关，该方药对胃癌细胞生长增殖具有抑制作用，抑制作用与给药浓度成正比。中药对来源不同、分化程度不同的胃癌细胞株药物敏感性不同，抑瘤作用与抑制胃癌细胞增殖活性正相关。CyclinD1、Bcl-2、Caspase-3的表达与胃癌的进展与转移密切相关，其中CyclinD1、bcl-2的表达与胃癌细胞的增殖呈正相关，Caspase-3的表达与胃癌细胞的凋亡呈正相关。通过运用益气解毒法对胃癌细胞株及对荷瘤裸鼠进行MTT实验、免疫荧光实验、免疫组化实验及Westernblot实验等研究得出，益气解毒法对胃癌细胞具有抑制增殖、促进凋亡的作用，对荷瘤裸鼠具有抑瘤作用。

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中文摘要

英文摘要

前言

材料和方法

1 实验材料

2 实验方法

3 观测指标及统计方法

结果

1．预实验结果

2．MTT结果

3．免疫荧光结果

4．抑瘤率结果

5．免疫组化结果

6． Westernblot结果

理论探讨

1 现代医学对胃癌的认识和治疗进展

2 祖国医学对本病的认识和研究

3 现代研究

结论

参考文献

致谢

附录

附录1：免疫荧光照片

附录2：免疫组化照片

附录3：Western blot照片

附录4 文献综述: 中医药治疗胃癌的研究

附录5：在校期间论文论著和科研情况