去整合素echistatin对糖尿病兔后发性白内障模型中ILK介导信号通路的影响

摘要

背景：后发性白内障（PCO）作为白内障术后最常见的并发症，在糖尿病患者中发病率更高。糖尿病性PCO不仅导致术后已恢复视力的再次下降，同时也影响糖尿病患者眼底检查和视网膜光凝及玻璃体手术等治疗。Echistatin作为去整合素家族的一员，课题组前期研究发现，10.0mg·L-1echistatin可抑制糖尿病兔晶状体摘出术后晶状体上皮细胞（LECs）的增殖、迁移和上皮-间质转分化，并发现糖尿病兔术后随着时间的推移PCO形成逐渐加重，术后10天（10d）LECs开始发生增殖，术后6周（6w）时达到高峰。但echistatin抑制糖尿病兔PCO形成的分子机制目前仍不清楚。
　　目的：观察去整合素echistatin对糖尿病兔PCO形成过程中信号因子ILK(Integrin-Linked Kinase)及其下游信号通路PI3-K/Akt和ERK1/2的影响，从分子水平上探讨echistatin的抑制作用。
　　方法：⑴应用四氧嘧啶（ALX）耳缘静脉注射建立糖尿病兔模型（n=56），随机分组并行晶状体摘出术（右眼），术毕前房分别注入0.2mL高压灭菌蒸馏水（对照组，n=28），0.2mL10.0mg·L-1 echistatin溶液（echistatin干预组，n=28）；每组又分为10d和6w2个时间点(n=14/每组)。⑵术后术眼予抗炎、抗感染及扩瞳治疗，并于裂隙灯显微镜下观察各组术眼角膜、前房及PCO分级情况。⑶术后10d及6w摘取术眼，制成蜡块，应用HE法观察晶状体后囊膜上LECs的变化及角膜和视网膜情况。⑷术后10d及6w摘取术眼，分别应用RT-PCR法、western blot法及免疫组化法检测术后晶状体后囊膜上ILK基因及蛋白表达情况。⑸术后10d及6w摘取术眼，取下后囊膜，应用western blot法检测Akt和ERK1/2蛋白磷酸化变化情况。
　　结果：①术眼观察：术后两组糖尿病兔眼角膜水肿和前房炎症比较无明显差异（P＞0.05）。②PCO分级：术后10d,两组糖尿病兔眼PCO分级比较无明显差异（P=0.057），但echistatin干预组PCO1级眼数（3眼）明显少于对照组（8眼）；术后6w，echistatin干预组PCO分级较对照组明显降低（P=0.001）。③组织病理形态观察：术后10d及6w，echistatin干预组后囊膜上LECs的增殖及迁移情况均明显低于对照组；echistatin干预组的角膜及视网膜在术后早期及晚期结构均保持完整，未见药物引起的明显毒性损伤反应。④ILK表达变化：术后10d及6w，echistatin干预组ILK蛋白表达较对照组明显下降（P=0.000和0.016），ILK mRNA表达亦明显低于对照组（P=0.005和0.008 vs echistatin干预组）。⑤Akt和ERK1/2表达变化：术后10d及6w，echistatin干预组Akt和ERK1/2磷酸化水平受到抑制，p-Akt/Akt及p-ERK/ERK表达较对照组明显下降（P＜0.05）。
　　结论：去整合素echistatin对糖尿病兔后发性白内障的发生和发展有一定的抑制作用，其发生机制可能与echistatin抑制ILK表达并阻断其下游信号通路PI3-K/Akt和ERK1/2传导有关。

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中文摘要

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前言

1 材料和方法

1.1 实验材料

1.2 实验方法

2 结果

2.1 术后术眼观察

2.2 术眼PCO分级

2.3 组织病理形态观察

2.4 ILK表达变化

2.5 Akt和ERK1/2表达变化

3 讨论

4 结论

参考文献

附图

中英文缩略词对照

综述: 整合素信号通路与后发性白内障的研究现状

致谢

攻读学位期间发表的学术论文