补肾解毒通络方对EAE大鼠的防治作用和对干扰素-γ影响的研究

摘要

目的：观察补肾解毒通络方对Wistar大鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)的临床表现、中枢神经系统病理学改变及干扰素-γ在发病过程中的影响，探讨MS的防治和治疗机制，为开发多发性硬化症新的治疗途径提供有意义的基础实验依据。
　　方法：
　　（1）取健康雌性Wistar大鼠75只，随机分为：空白组、模型组、中药治疗组，中药治疗组又按剂量不同分为低剂量治疗组、中剂量治疗组、高剂量治疗组，每组15只。空白组不做任何处理；模型组造模后开始每天给与生理盐水0.2ml灌胃；中药组免疫当天开始给药，高剂量组每天按每公斤体重60g生药量给予中药2ml灌胃，中剂量组每天按每公斤体重30g生药量给予1ml灌胃，低剂量组每天按每公斤体重15g生药量给予0.5ml灌胃，以上灌胃方法均灌胃至实验终止。
　　（2）EAE模型建立：采用豚鼠脊髓匀浆和完全福式佐剂（CFA）制成的混合液作为抗原，同时皮内注射百日咳疫苗。对除空白组以外，每日观察造模后各组动物的临床表现，测量体重变化，并给予神经功能的评分。
　　（3）样本采集：分别于免疫后第14天和第21天，采用眼眶后静脉丛采血法采取静脉血，心脏灌流后取脑、脊髓置于4％多聚甲醛中固定，石蜡包埋、切片。
　　（4）苏木素-伊红（HE）法染色观察脑、脊髓病理改变；ELISA法测定血清内干扰素-γ含量。
　　结果：
　　（1）补肾解毒通络方高、中剂量组大鼠的发病率与EAE组相比明显减低；补肾解毒通络方高、中、低组大鼠的平均潜伏期较EAE组明显延长；补肾解毒通络方高、中剂量组大鼠发病高峰期、发病缓解期的神经功能评分明显低于EAE组；补肾解毒通络方高、中剂量组大鼠发病高峰期、发病缓解期的体重明显高于EAE组和中药低剂量组。
　　（2）发病高峰期补肾解毒通络方高、中、低剂量组大鼠CNS中炎性病灶数与EAE组相比显著减少，且中药的高、中剂量组病灶数低于低剂量组，发病缓解期补肾解毒通络方高、中剂量组大鼠CNS中炎性病灶数与EAE组相比显著减少，低剂量组与EAE组相比无明显差异。
　　（3）补肾解毒通络方高、中、低剂量组发病高峰期血清干扰素-γ含量较EAE组显著降低；补肾解毒通络方高、中剂量组发病缓解期血清干扰素-γ含量较EAE组显著降低，低剂量组显著高于高剂量组，高、中剂量组无显著差异。
　　结论：
　　（1）补肾解毒通络方预防性治疗可以明显降低急性EAE大鼠的发病率、缓解临床症状、抑制体重下降、缩短病程。
　　（2）补肾解毒通络方预防性治疗能减轻发病时神经功能损伤的程度，减轻 EAE大鼠中枢神经系统炎症。
　　（3）补肾解毒通络方防治MS作用的部分机制可能是通过下调大鼠血清中干扰素-γ的表达，达到抑制炎症反应和自身免疫反应的作用。
　　（4）补肾解毒通络方高、中剂量疗效差异不明显。

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中文摘要

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前言

材料与方法

1 材料

2 方法

3 资料分析以及统计学处理

结果

1．各组大鼠的临床表现观察

2. 各组大鼠CNS组织HE染色病理观察

3 各组大鼠发病高峰期、发病缓解期血清IFN-γ含量测定结果

讨论

1 补肾解毒通络方的来源及临床意义

2 Wistar大鼠EAE模型的特点

3 补肾解毒通络方对EAE大鼠的预防性治疗作用和机制探讨

结论

致谢

参考文献

附录1 病理图片

附录2 文献综述: 多发性硬化的研究进展