不同浓度脱氢表雄酮对小鼠蜕膜化子宫内膜基质细胞增殖及dPRP mRNA表达的影响

摘要

本文分析了不同浓度脱氢表雄酮对小鼠蜕膜化子宫内膜基质细胞增殖及dPRPmRNA表达的影响。本研究分为两个部分：
　　第一部分：小鼠子宫内膜基质细胞的培养、鉴定和雌孕激素诱导体外蜕膜化。
　　目的：分离培养及鉴定小鼠子宫内膜基质细胞，添加雌孕激素培养诱导体外蜕膜化。
　　方法：I型胶原酶和中性蛋白酶混合消化剪碎的妊娠第4天小鼠的子宫组织，经自然沉降残存组织块，细胞筛过滤细胞液、差速贴壁纯化，分离培养子宫内膜基质细胞。细胞培养24小时后，通过细胞免疫荧光对基质细胞胞浆阳性表达的波形蛋白及上皮细胞胞浆阳性表达的角蛋白进行染色，鉴定细胞纯度。将细胞分为对照组及模型组，模型组细胞培养液中添加雌孕激素，对照组中不添加雌孕激素，荧光定量PCR检测两组细胞蜕膜化标志物蜕膜催乳素相关蛋白（dPRP）mRNA的表达。
　　结果：基质细胞荧光染色仅波形蛋白染色阳性，角蛋白染色阴性，分离培养的细胞中基质细胞比例达95.6±2.9％。模型组与对照组dPRP mRNA的相对表达量分别为1.00000±0.00000、0.00017±0.00004，P＜0.05。
　　结论：本实验可得到纯度较高的子宫内膜基质细胞，通过体外添加雌孕激素培养小鼠子宫内膜基质细胞，成功建立了体外蜕膜化模型。
　　第二部分：不同浓度脱氢表雄酮对小鼠蜕膜化子宫内膜基质细胞增殖及dPRP mRNA表达的影响。
　　目的：观察不同浓度脱氢表雄酮（DHEA）对小鼠蜕膜化子宫内膜基质细胞增殖及蜕膜催乳素相关蛋白（dPRP）mRNA表达的影响。
　　方法：体外分离培养妊娠第4天小鼠的子宫内膜基质细胞。将细胞分为实验1组、实验2组、实验3组、实验4组、模型组、对照组；各实验组与模型组以E2、P4诱导蜕膜化，实验1、2、3、4组分别加入0.1、1、10、50μmol/L的DHEA，模型组不加DHEA，对照组培养液不给予E2、P4及DHEA处理；培养72 h后采用real-time PCR法检测细胞中的dPRP mRNA，分别于培养24、48 h后，倒置显微镜下观察细胞形态变化。取各实验组、模型组的细胞悬液接种于96孔板，培养72 h后测算细胞增殖能力。
　　结果：实验1、2、3、4组细胞中dPRPmRNA相对表达量分别为0.978±0.258、0.764±0.135、0.250±0.022、0.013±0.000，模型组为1.000±0.000。实验3、4组dPRP mRNA相对表达量与模型组相比，P均＜0.05。实验组组内相比，实验2组与实验4组相比，P＜0.05，余各组之间比较P＞0.05。对照组细胞呈成纤维细胞样；模型组细胞形态更饱满，胞质增多；实验1、2组细胞形态与模型组近似，实验3、4组细胞呈多角形，胞质减少。实验1、2、3、4组细胞吸光度值分别为1.2228±0.0382、0.7905±0.2071、0.5925±0.2298、0.2658±0.0374，模型组为1.1497±0.1062。实验3、4组与模型组相比，P均＜0.05。实验组组内相比，实验1组与实验2、3、4组相比，P均＜0.05；实验2组与实验3组相比，P＞0.05，与实验4组相比，P＜0.05；实验3组与实验4组相比，P＞0.05。
　　结论：0.1、1μmol/L DHEA对小鼠子宫内膜基质细胞增殖及dPRP mRNA表达无明显影响，而10、50μmol/L DHEA可抑制细胞增殖，并下调dPRP mRNA表达。

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前言

第一部分 小鼠子宫内膜基质细胞的培养、鉴定和雌孕激素诱导体外蜕膜化

引言

材料与方法

结果

讨论

第二部分 不同浓度脱氢表雄酮对小鼠蜕膜化子宫内膜基质细胞增殖及dPRP mRNA表达的影响

引言

材料与方法

结果

讨论

全文总结

参考文献

附录

综述：子宫内膜蜕膜化的激素调节研究进展

致谢

攻读学位期间发表的学术论文