杨桃根中2-十二烷基-6-甲氧基-2,5-二烯-1,4-环已二酮对胰岛素抵抗小鼠的影响

摘要

目的:
　　探讨杨桃根中的2-十二烷基-6-甲氧基-2,5-二烯-1,4-环己二酮(2-dodecyl-6-methoxycyclohexa-2,5-diene-1,4-dione,DMDD)对高脂高糖饮食引起的胰岛素抵抗小鼠的影响及其可能的作用机制。
　　方法:
　　将6～8周龄的雄性C57BL/6J小鼠随机地分成两组:正常饮食(ND或者Normal)组及高脂高糖饮食(HF SD)组,HFSD组采用高脂高糖饲料喂养12周后将体重超过ND组体重的20％且空腹血糖(FBG)≧7.8mmol/L的小鼠随机分为模型(Model)组、二甲双胍(Metformin)组、DMDD低剂量(DMDDL)组、DMDD中剂量(DMDDM)组、DMDD高剂量(DMDDH)组;随后各组小鼠灌胃给药4周,DMDD低、中、高组、Metformin组的给药剂量分别为:12.5、25.0、50.0、280mg·kg-1,Normal及Model组给予等体积的双蒸水;给药期间,每周称体重、测FBG,第14周末进行糖耐量试验(IPGTT)、第15周进行胰岛素耐量试验(ITT)、第16周初进行胰岛素释放试验(IRT),16周末,取血,处死小鼠,测量如下指标:
　　1.测量体长、腹围,称量肝脏、胰腺及附睾脂肪;比色法测血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG);按试剂盒说明书测定肝脏组织中丙二醛(MDA)的含量、总超氧化物歧化酶(T-SOD)及还原型谷胱甘肽(GSH-PX)的活性;
　　2.酶联免疫吸附法(ELISA)测血清胰岛素(Insulin)、游离脂肪酸(FFA)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)、瘦素(LEP)、抵抗素(Resistin)及脂联素(ADP),计算胰岛素抵抗指数(IRI)、胰岛素敏感指数(ISI)、糖耐量曲线下面积(IPGTT AUC)、胰岛素耐量曲线下面积(ITT AUC)、胰岛素释放试验曲线下面积(IRT AUC);
　　3.苏木精-伊红(HE)染色法观察附睾脂肪组织、肝脏组织及胰腺组织的病理变化;免疫组化法测定肝脏及胰腺组织中Toll样受体4(TLR4)、髓样分化因子88(MyD88)、核因子-κB(NF-κB)及凋亡相关蛋白:含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解-3(Caspase-3)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解-8(Caspase-8)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解-9(Caspase-9),Bcl-2相关X蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)的表达;采用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)法检测胰岛细胞凋亡。
　　4.实时定量-聚合酶链式反应(RTQ-PCR)法测定肝脏及脂肪组织中TLR4、MyD88、NF-κB、TNF-α及IL-6mRNA的表达。
　　结果:
　　1.与模型组比较,DMDD各剂量组小鼠的体重、附睾脂肪重量、肝脏比重、FBG、TC、TG、肝脏组织中MDA的含量显著降低(P＜0.01),T-SOD及GSH-PX的活性明显提高,但体长、腹围及进食量的变化不明显;
　　2.与模型组比较,血清Insulin、FFA、TNF-α、IL-6、LEP、Resistin明显降低,ADP、ISI明显提高;DMDD各剂量组各个时间点的血糖及AUC均显著降低;
　　3.HE染色显示治疗组脂肪细胞的面积变小、脂滴沉积减少,肝脏脂肪变性明显改善;与模型组相比,经二甲双胍及DMDD治疗后,胰岛细胞的结构基本完整。免疫组化显示治疗组的肝脏及胰腺组织中的TLR4、MyD88、NF-κB,凋亡相关蛋白Caspase-3、-8、-9及促凋亡蛋白Bax的表达显著减少(P＜0.01),而抗凋亡蛋白Bcl-2明显增多;与正常组比较,模型组中凋亡的胰岛细胞数明显增加;与模型组比较,各治疗组的胰岛细胞凋亡数明显减少;
　　4.RTQ-PCR显示,与正常组比较,肝脏及脂肪组织中的TLR4、MyD88、NF-κB、TNF-α及IL-6mRNA被上调;与模型组比较,经DMDD及Metformin治疗后,TLR4、MyD88、NF-κB、TNF-α及IL-6mRNA下调。
　　结论:
　　DMDD对肥胖诱导的胰岛素抵抗具有防治作用。其作用可能与其改善肥胖、高血糖、高血脂,抗氧化、抗炎、抑制凋亡有关;其改善IR的机制可能与TLR4/MyD88/NF-κB信号通路有关。

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摘要

前言

参考文献

第一章 DMDD对胰岛素抵抗小鼠肥胖及胰岛素敏感性的影响

1 实验材料

2 实验方法

3 实验结果

4 讨论

5 小结

参考文献

第二章 DMDD对胰岛素抵抗小鼠的氧化应激及细胞因子的影响

1 实验材料

2 实验方法

3 实验结果

4 讨论

5 小结

参考文献

第三章 DMDD对胰岛素抵抗小鼠炎症、凋亡相关基因及蛋白的影响

1 实验材料

2 实验方法

3 实验结果

4 讨论

5 小结

参考文献

全文结论

综述

致谢

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