甘草酸二铵对百草枯致大鼠肺纤维化中TGF-β1和CTGF的影响

摘要

目的:百草枯中毒可造成多系统损伤，而肺是百草枯中毒的主要靶器官，早期表现为急性肺损伤或急性呼吸窘迫综合征(ARDS)，后期出现肺间质纤维化，但百草枯中毒损伤机制目前尚不完全清楚，之前的研究证实TGF-β1在百草枯诱导的急性肺损伤和肺纤维化中起关键作用，甘草酸二铵(DG)对百草枯诱导的急性肺损伤有保护作用。本研究通过动物实验观察转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1，TGF-β1)、结缔组织生长因子(connective tissue growth factor，CTGF)在百草枯致大鼠肺纤维化中表达水平的影响，探讨百草枯(paraquat，PQ)中毒致大鼠肺纤维化的可能机制，并通过甘草酸二铵(diammonium glycyrrhizinate，DG)的干预，探讨甘草酸二铵对百草枯中毒致大鼠肺纤维化的干预作用及可能机制。为揭示百草枯致肺纤维化机理，寻找治疗的靶点及相关药物作出有益的尝试。
　　方法:选用健康成年雄性SD大鼠30只，按随机数字表法随机分成3组:分别为对照组、中毒组、治疗组。其中中毒组和治疗组用生理盐水稀释的百草枯20mg/kg一次性灌胃制作大鼠PQ中毒肺纤维化模型。对照组予以等量生理盐水灌胃。治疗组于中毒后24小时后，给予75mg/kg甘草酸二铵行性腹腔注射，同时对照组及中毒组注射等量生理盐水，每天1次，直至死亡或被处死，于中毒后第21天全部处死。实验过程中观察大鼠的一般状况，毛色、呼吸、精神状态以及进食等情况。处死后开胸取出肺组织，做常规组织制备病理切片，进行苏木精-伊红染色（HE染色）普通光学显微镜下观察肺部的炎症病理改变和损伤情况，做Masson三色染色来观察鉴定肺部的纤维化病变;采用样本碱水解法检测肺组织中羟脯氨酸(HYP)的含量来判断肺组织的纤维化程度;采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测肺组织内TGF-β1、CTGF的mRNA的表达水平。
　　结果:1.大鼠一般情况:对照组大鼠精神状态佳，反应灵敏，呼吸正常，毛色洁净光泽，进食进水及排泄均正常，体重随着实验时间延长稳定增加。中毒组大鼠随PQ中毒时间的延长，逐渐出现精神萎靡不振，反应差，活动减少、呼吸促、紫绀，皮毛蓬松，进食进水减少，体重增加缓慢。治疗组大鼠，在给药干预前，其中毒症状与中毒组相同，给药干预后，中毒反应较中毒组减轻，精神反应较灵敏，毛色较洁净，较少出现呼吸急促，进食及进水较正常，体重随着实验时间延长增加。2.HE染色显示，对照组肺组织、支气管、肺泡结构完整、清晰，组织联系紧密，细胞核圆且大，细胞质均匀丰富，无其他炎性细胞浸润。中毒组肺泡间隔有充血水肿、增宽明显，肺泡腔变小，血管内皮细胞损伤广泛，有少许淋巴细胞浸润肺间隔，肺间质组织增生明显，胶原纤维增生。治疗组肺泡内充血水肿、炎性细胞浸润和组织增生明显范围明显低于中毒组。3.Masson染色显示，对照组肺间隔仅少量的蓝染胶原纤维沉积;中毒组肺泡间隔可见大量蓝染的胶原纤维;治疗组肺泡间隔纤维化程度明显低于中毒组。4.与对照组比较，中毒组肺组织中HYP的含量有明显升高，差异有统计学意义(P＜0.05)，与中毒组比较，治疗组肺组织中HYP的含量有明显下降，差异有统计学意义(P＜0.05);5.RT-PCR检测结果显示，与对照组比较，中毒组肺组织中TGF-β1、CTGF的mRNA的表达水平明显升高，差异有统计学意义(P＜0.05);与中毒组比较，治疗组肺组织中TGF-β1、CTGF的mRNA的表达水平明显下降，差异有统计学意义(P＜0.05)。
　　结论:1、百草枯中毒导致大鼠肺纤维化中，肺组织的TGF-β1、CTGFmRNA的表达升高，提示TGF-β1、CTGF可能参与了百草枯中毒致大鼠肺纤维化的过程。
　　2、药物甘草酸二铵可能通过减少肺组织中TGF-β1、CTGF的分泌，从而减轻百草枯中毒致大鼠肺纤维化的程度。

目录

声明

个人简历

摘要

前言

材料与方法

1．实验材料

2．实验方法

3．统计学处理

结果

1．实验动物观察

2．肺脏大体观察

3 光镜下肺组织病理观察(HE及Masson)

4．大鼠肺组织中羟脯氨酸(HYP)含量的变化

5．大鼠肺组织中TGF-β1的mRNA的表达水平

5．大鼠肺组织中CTGF的mRNA的表达水平

讨论

1、PQ中毒致肺纤维化的病理特点

2、转化生长因子-β1、结缔组织生长因子在PQ中毒致大鼠肺纤维化中的变化

3、甘草酸二铵干预TGF-β1和CTGF在百草枯致大鼠肺纤维化中的表达

结论

参考文献

附录

综述 百草枯中毒致肺纤维化机制的研究进展

致谢

攻读学位期间发表的学术论文