不同心肌组织裂解液对BMSCs定向分化影响的初步研究

摘要

目的:完善对心肌组织样结构的鉴定，探究不同心肌组织裂解液对骨髓间充质干细胞(BMSCs)定向分化的影响;探究组织工程化心肌的构建。
　　方法:以全心组织裂解液定向诱导BMSCs分化为心肌组织样结构为实验对照，分别用心房肌组织裂解液、心室肌组织裂解液诱导BMSCs定向分化。倒置相差显微镜下观察诱导过程中细胞的形态变化，透射电镜观察细胞的超微结构，免疫荧光细胞化学染色检测各组细胞相关蛋白(α-actin和cTnⅠ)，qRT-PCR检测各组细胞ANP、HCN4和MLC-2v基因的表达。采用免疫荧光组织化学染色方法，检测心肌组织样结构内相关蛋白（collagenⅠ、collagenⅢ、VEGF、vWF、CD31以及cTnⅠ），探究心肌组织样结构的构成。
　　结果:(1)全心组织裂解液能诱导BMSC分化为较复杂的心肌组织样结构，经免疫荧光染色法检测，可见结构内有cTnⅠ、VEGF、vWF、CD31阳性细胞，细胞间检测出collagenⅠ、collagenⅢ，且以collagenⅠ为主。(2)全心组织裂解液能诱导BMSCs分化为较复杂的心肌组织样结构，在同等条件下，心房肌组织裂解液和心室肌组织裂解液不能诱导出心肌组织样结构。(3)心房肌组织裂解液组，在诱导分化的过程中，观察到有大量的分泌颗粒产生。(4)心房肌组织裂解液诱导组中可检测到ANP、HCN4高表达，MLC-2v不表达。心室肌组织裂解液诱导组中可检测到MLC-2v高表达，ANP、HCN4不表达。
　　结论:全心组织裂解液诱导BMSCs形成的心肌组织样结构，不仅有心肌样细胞，还有早期分化的内皮样细胞;结缔组织包裹心肌样细胞形成束状结构，内含大量主要成分为Ⅰ型胶原蛋白的胶原纤维。心房肌组织裂解液可诱导BMSCs向心房肌细胞方向分化，心钠素ANP高表达，窦房结细胞标志物HCN4高表达。心室肌组织裂解液可诱导BMSCs向心室肌细胞方向分化，心室肌细胞特异性肌球蛋白轻链MLC-2v高表达。功能活动对形态与结构的发生、发育有重要的促进作用，是形态与结构发育成熟的必备条件。

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综述 骨髓间充质干细胞在组织工程化心肌中的研究进展

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