黄芪提取物对Müller细胞氧化损伤保护机制研究

摘要

目的：研究黄芪注射液对H202诱导人视网膜Müller细胞损伤的保护作用及抗凋亡的相关机制。
　　方法：常规方法培养人视网膜Müller细胞，H2O2作用于Müller细胞，建立细胞损伤模型，实验分为空白对照组、模型组、黄芪提取物低、中、高3个剂量组(10 mg/L、30 mg/L、90mg/L)。 MTT法观察不同浓度黄芪注射液对各组Müller细胞活力的影响；流式细胞仪检测各组Müller细胞凋亡情况；免疫印迹法检测各组Müller细胞中Caspase-3和NF-κB蛋白的表达情况；RT-PCR法检测各组Müller细胞内Caspase-3和NF-κB的mRNA表达情况。
　　结果：1.MTT结果表明，与空白对照组（0.94±0.02）比较，模型组（0.43±0.01）细胞存活率明显下降(P<0.01)，与模型组比较，黄芪注射液各组(低、中、高浓度组分别为0.47±0.02、0.56±0.04、0.71±0.03)细胞存活率明显升高(P<0.05)，差异具有统计学意义。
　　2.流式细胞仪检测细胞凋亡结果显示，与空白对照组（4.06％）比较，模型组细胞凋亡率（41.81%）明显上升（P<0.01），黄芪注射液（低、中、高浓度组分别为32.95%、24.52%、18.49%，较对照组细胞凋亡率也明显升高（P<0.01），而各实验组与模型组比较，细胞凋亡率均有不同程度的下降(P<0.05)，差异具有统计学意义。
　　3. Western-blot检测蛋白表达结果显示，与空白对照组比较，模型组Caspase-3和NF-κB蛋白表达量均明显上升（P<0.01），黄芪注射液各组与模型组比较，Caspase-3、NF-κB的蛋白表达量明显下降（P<0.05），差异具有统计学意义。4. RT-PCR检测mRNA表达结果显示，与空白对照组比较，模型组Caspase-3和NF-κBmRNA表达量均明显上升（P<0.01），黄芪注射液各组与模型组比较，Caspase-3和NF-κBmRNA表达量均明显下降（P<0.05），差异具有统计学意义。
　　结论：实验结果表明，黄芪注射液可明显抑制H2O2对Müller细胞造成的氧化损伤，提高细胞存活率，降低细胞凋亡率，降低细胞内Caspase-3和NF-κB的蛋白和mRNA表达。其作用机制可能是黄芪有效成分作用于细胞凋亡反应过程中的关键调控因子和细胞内核转录因子NF-κB介导的上游信号通路，从而起到抗氧化损伤和凋亡作用。

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前言

实验材料、试剂与仪器

实验方法与步骤

结果

讨论

结论

参考文献

致谢

附录1 文献综述: 黄芪药理作用研究进展与展望

附录2在校期间论文论著和科研情况