泻火平突散对IFN-γ刺激后人球后成纤维细胞的影响

摘要

目的：1）观察泻火平突散含药血清对IFN-γ刺激后人球后成纤维细胞增殖，HA、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原合成，MMP-1、MMP-2、TIMP-1、TIMP-2活性，ICAM-1、HLA-DR、CD40表达的影响；2)探讨泻火平突散治疗TAO的机制。
　　方法：外伤性白内障手术患者及外伤性双眼晶状体半脱位手术患者来源的球后成纤维细胞进行体外原代、传代培养，取2～8代的细胞进行鉴定，确定为球后成纤维细胞后，先进行预实验，确定20％泻火平突散含药血清为最佳剂量，然后进行正式分组实验。空白对照组用含20%胎牛血清的正常培养液培养；空白大鼠血清对照组用含20%正常大鼠血清的培养液培养；模型组用含20%正常大鼠血清和200u/mlIFN-γ的培养液培养；泻火平突散组用含20%泻火平突散含药血清和200u/mlIFN-γ的培养液培养。然后分别用MTT法、ELISA法、免疫细胞化学法、流式细胞仪检测各组RFs的增殖，HA、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原合成，MMP-1、MMP-2、TIMP-1、TIMP-2活性，ICAM-1、HLA-DR、CD40表达的情况，并对实验数据进行统计分析。
　　结果：1）MTT法检测四组的OD值以评价各组RFs的增殖情况，空白对照组、空白大鼠血清对照组两组比较无统计学差异（P>0.05）；模型组OD值较空白对照组、空白大鼠血清对照组明显升高，差异有统计学意义（P<0.05）；泻火平突散组OD值较模型组明显降低，差异有统计学意义（P<0.05）。2）用ELISA法检测四组HA、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原的合成，空白对照组、空白大鼠血清对照组两组比较无统计学差异（P>0.05）；模型组HA、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原合成较空白对照组、空白大鼠血清对照组明显升高，差异有统计学意义（P<0.05）；泻火平突散组HA、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原合成较模型组明显降低，差异有统计学意义（P<0.05）。3）用免疫细胞化学法检测四组MMP-1、MMP-2活性，空白对照组、空白大鼠血清对照组两组比较无统计学差异（P>0.05）；模型组MMP-1、MMP-2活性较空白对照组、空白大鼠血清对照组明显降低，差异有统计学意义（P<0.05）；泻火平突散组MMP-1、MMP-2活性较模型组明显增高，差异有统计学意义（P<0.05）。4）用免疫细胞化学法检测四组TIMP-1、TIMP-2活性，空白对照组、空白大鼠血清对照组两组比较无统计学差异（P>0.05）；模型组TIMP-1、TIMP-2活性较空白对照组、空白大鼠血清对照组明显增高，差异有统计学意义（P<0.05）；泻火平突散组TIMP-1、TIMP-2活性较模型组明显降低，差异有统计学意义（P<0.05）。5）用流式细胞仪检测四组ICAM-1、HLA-DR、CD40表达，空白对照组、空白大鼠血清对照组两组比较无统计学差异（P>0.05）；模型组ICAM-1、HLA-DR、CD40表达较空白对照组、空白大鼠血清对照组明显升高，差异有统计学意义（P<0.05）；泻火平突散组ICAM-1、HLA-DR、CD40表达较模型组明显降低，差异有统计学意义（P<0.05）。
　　结论：泻火平突散能够通过抑制球后成纤维细胞的增殖，抑制ICAM-1、HLA-DR、CD40的表达，调节MMPs/TIMPs平衡，抑制HA、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原的合成来治疗TAO。

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前言

实验与方法

1 实验所需材料

2 泻火平突散含药血清的制备

3 RFs的培养与鉴定

4 预实验确定最佳剂量

5 实验分组

6 实验指标检测

7 统计分析

结果

1 四组RFs增殖的比较

2 四组HA、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原合成的比较

3 四组MMP-1、MMP-2、TIMP-1、TIMP-2活性的比较

4 四组ICAM-1、HLA-DR、CD40表达的比较

讨论

1 中医对TAO病因、病位、病机的认识

2 中医对TAO的辨证治疗

3 燕树勋教授治疗TAO的经验

4 泻火平突散的组方分析

5 泻火平突散治疗TAO的机制探讨

6 问题与展望

结论

致谢

参考文献

附录1实验相关图片

1.1 球后成纤维细胞的原代培养

1.2 传代与复苏

1.3 球后成纤维细胞鉴定

1.4 免疫细胞化学染色

1.5 流式细胞图

附录2文献综述: 甲状腺相关眼病发病机制研究现状