泻火平突散对IFN-γ刺激后人球后成纤维细胞的影响

摘要

目的：1)观察泻火平突散含药血清对IFN-γ刺激后人球后成纤维细胞增殖,HA、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原合成,MMP-1、MMP-2、TIMP-1、TIMP-2活性,ICAM-1、HLA-DR、CD40表达的影响;2)探讨泻火平突散治疗TAO的机制. 方法：外伤性白内障手术患者及外伤性双眼晶状体半脱位手术患者来源的球后成纤维细胞进行体外原代、传代培养,取2～8代的细胞进行鉴定,确定为球后成纤维细胞后,先进行预实验,确定20％泻火平突散含药血清为最佳剂量,然后进行正式分组实验.空白对照组用含20％胎牛血清的正常培养液培养;空白大鼠血清对照组用含20％正常大鼠血清的培养液培养;模型组用含20％正常大鼠血清和200u/ml IFN-γ的培养液培养;泻火平突散组用含20％泻火平突散含药血清和200u/ml IFN-γ的培养液培养.然后分别用MTT法、ELISA法、免疫细胞化学法、流式细胞仪检测各组RFs的增殖,HA、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原合成,MMP-1、MMP-2、TIMP-1、TIMP-2活性,ICAM-1、HLA-DR、CD40表达的情况,并对实验数据进行统计分析. 结果：1)MTT法检测四组的OD值以评价各组RFs的增殖情况,空白对照组、空白大鼠血清对照组两组比较无统计学差异(P＞0.05);模型组OD值较空白对照组、空白大鼠血清对照组明显升高,差异有统计学意义(P＜0.05);泻火平突散组OD值较模型组明显降低,差异有统计学意义(P＜0.05).2)用ELISA法检测四组HA、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原的合成,模型组HA、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原合成较空白对照组、空白大鼠血清对照组明显升高,差异有统计学意义(P＜0.05);泻火平突散组HA、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原合成较模型组明显降低,差异有统计学意义(P＜0.05).3)用免疫细胞化学法检测四组MMP-1、MMP-2活性,空白对照组、空白大鼠血清对照组两组比较无统计学差异(P＞0.05);模型组MMP-1、MMP-2活性较空白对照组、空白大鼠血清对照组明显降低,差异有统计学意义(P＜0.05);泻火平突散组MMP-1、MMP-2活性较模型组明显增高,差异有统计学意义(P＜0.05).4)用免疫细胞化学法检测四组TIMP-1、TIMP-2活性,空白对照组、空白大鼠血清对照组两组比较无统计学差异(P＞0.05);模型组TIMP-1、TIMP-2活性较空白对照组、空白大鼠血清对照组明显增高,差异有统计学意义(P＜0.05);泻火平突散组TIMP-1、TIMP-2活性较模型组明显降低,差异有统计学意义(P＜0.05).5)用流式细胞仪检测四组ICAM-1、HLA-DR、CD40表达,空白对照组、空白大鼠血清对照组两组比较无统计学差异(P＞0.05);模型组ICAM-1、HLA-DR、CD40表达较空白对照组、空白大鼠血清对照组明显升高,差异有统计学意义(P＜0.05);泻火平突散组ICAM-1、HLA-DR、CD40表达较模型组明显降低,差异有统计学意义(P＜0.05). 结论：泻火平突散能够通过抑制球后成纤维细胞的增殖,抑制ICAM-1、HLA-DR、CD40的表达,调节MMPs/TIMPs平衡,抑制HA、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原的合成来治疗TAO.