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广西巴马小型猪内源性反转录病毒的检测及分子生物学特性的研究

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论文说明:英文缩略词表

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前言

第一部分广西巴马小型猪内源性反转录病毒的检测

1、材料

2、方法

3、结果

4、讨论

5、结论

第二部分半定量RT-PCR分析PERVmRNA在广西巴马小型猪不同组织的表达

1、材料

2、方法

3、结果

4、讨论

五、结论

第三部分广西巴马小型猪PERV的囊膜糖蛋白(env)基因遗传进化分析

1、材料

2、方法

3、结果

4、讨论

5、结论

参考文献

附表

致谢

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摘要

猪内源性反转录病毒(PERV)为反转录病毒科(Retroviridae)哺乳动物C型反转录病毒属(Mammalian Type C Retroviridae)成员,它是以前病毒DNA的形式整合进猪细胞基因组中,并随细胞染色体复制而复制。1997年,Patience等发现PERV在体外可以感染人的多种细胞,激起了人们对PERV与猪-人异种移植病原安全性的广泛关注。 因此,筛选培育无PERV猪群,为异种移植提供安全可靠的供体源。本研究利用国内已建立的PERV检测方法对广西巴马小型猪中PERV的存在情况进行调查。共采集了114份外周血样,通过PCR检测发现:广西巴马小型猪基因组中普遍存在PERV,其阳性率达100%。其中以A亚型最高(91.4%),其次为B亚型(87.7%),但没有发现C亚型。PERV主要结构蛋白基因gag、pol、env不仅在小型猪基因组中存在,而且都能够转录为RNA。广西巴马小型香猪PERV-A和B亚型病毒混合存在的现象十分严重,高达85.1%。 为了解PERV-mRNA在广西巴马小型猪各个组织表达丰度情况,本实验对采自两头巴马小型猪的肝、肺、胰、肾、心、脾、胸腺、卵巢、外周血等,进行半定量RT-PCR分析,结果发现PERV-mRNA在肾脏和外周血的表达丰度最高,在胰脏的表达丰度最低,而其它脏器的间没有显著的差异。 同时本研究还对巴马小型猪PERV-env基因在不同世系间的变化情况,克隆得到了18株env全长基因(包括7个世系和两组三代亲源关系),经过遗传进化树分析发现,所克隆得到的env全长基因都属于PERV-A亚型,同时发现在不同世系间某些位点发生了规律性的突变,但它们并没有引起抗原表位发生相应的改变。

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