黄牛卵母细胞和早期胚胎HAT1基因表达模式的研究

摘要

组蛋白乙酰化和去乙酰化可以改变染色质的结构，参与基因的表达调控和重编程。组蛋白乙酰基转移酶1(Histonc acctyltransferases 1，HAT1)主要在细胞质内对合成的组蛋白进行乙酰化修饰，调控组蛋白的乙酰化水-平。因此，研究卵母细胞成熟过程及早期胚胎发育过程中HAT1基因的表达模式，对深入了解动物个体的发生机理具有重要意义。 本研究首先以本地黄牛GV期卵母细胞mRNA为材料，根据黄牛在GenBank上的序列设计目的基因HAT1和内参基因SDHA的特异性扩增引物，通过反转录聚合酶链式扩增(RT-PCR)获得特异性扩增条带，经克隆测序验证，成功获得目的基因片段。HAT1和SDHA引物的扩增效率分别为106％和97％，可以用2-ΔΔct法对基因表达进行定量统计分析。 然后，收集黄牛GV期卵母细胞、M II期卵母细胞，体外受精(IVF)和孤雌激活(PA)方法得到2～4细胞、8～16细胞、桑椹胚和囊胚等实验材料，进行HAT1的实时定量PCR分析。结果发现，HAT1基因在黄牛GV期卵母细胞、M II期卵母细胞、IVF胚胎2～4细胞、8～16细胞、桑葚胚和囊胚中的相对表达量分别为1.00、0.56、0.09、0.55、0.43和0.31，在PA胚胎2～4细胞、8～16细胞、桑葚胚和囊胚中的相对表达量分别为0.55、0.55、0.48和0.46。HAT1在GV期相对表达量最高，在IVF胚胎中2～4细胞表达量最少(P<0.05)；在PA胚胎中，mRNA相对表达量相对稳定无明显波动。 以上结果表明，早期胚胎HAT1基因的相对低表达可能与受精后的父源染色质重编程有关；PA胚胎HAT1基因的相对稳定表达可能与父源基因没有参与胚胎发育有关。

目录

文摘

英文文摘

声明

第一章 组蛋白乙酰化及组蛋白乙酰基转移酶的研究进展

一、组蛋白乙酰化研究进展

(一)组蛋白研究概况

(二)组蛋白乙酰基转移酶(HATs)和去乙酰化酶(HDACs)

(三)组蛋白乙酰化作用

二、组蛋白乙酰基转移酶1(HAT1)综述

(一)HAT1的鉴定

(二)HAT1的生化特征

(三)HAT1对新合成的H4的乙酰化调节作用

(四)HAT1临床意义

三、本研究的目的和意义

第二章黄牛HAT1基因的克隆和实时定量PCR检测方法的建立

1材料与方法

2结果与分析

3讨论

4结论

第三章 黄牛卵母细胞和早期胚胎HAT1基因表达的研究

1材料与方法

2结果与分析

3讨论

4结论

参考文献

致谢

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