RNA激活上调胆囊癌细胞p21WAF1/CIP1基因表达的体外实验研究

摘要

目的：在胆囊癌细胞系GBC-SD中利用RNA激活技术上调人胆囊癌细胞（GBC-SD）中p21基因的表达，观察其对GBS-SD细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响。探讨将p21基因作为胆囊癌靶向治疗分子的可能性及其机制，为胆囊癌的基因治疗提供一定的理论基础和试验依据。
　　方法：将与p21基因启动子DNA序列互补的双链RNA分子dsp21-322及阴性对照片段dsControl分别转染入人胆囊癌细胞株GBC-SD中，空白对照组只加入脂质体，分别采用RT-PCR法和Western blot分别检测三组p21WAF1/CIP1基因mRNA及蛋白的表达情况；采用MTT法检测细胞增殖活性；用Transwell小室法检测RNAa后细胞侵袭、迁移能力的变化。
　　结果：dsRNA转染GBC-SD细胞72h后，RT-PCR及Western blot结果显示：与空白对照组和阴性对照组相比，实验组dsp21-322能有效上调GBC-SD细胞p21基因的表达，可以使其表达量增加到2倍左右。MTT法显示实验组GBC-SD的生长抑制较阴性对照组明显，在第2~5天四个时间点上实验组的存活率分别为74.1％、51.3%、44.8%、39.6%，与阴性对照组相比都有统计学差异(P<0.05)。Transwell侵袭及迁移实验显示：实验组 dsp21-322作用于胆囊癌细胞72h后，穿透至膜下表面的细胞数均低于空白组和对照组的细胞数差异有统计学意义（P<0.05）。
　　结论：1、dsp21-322转染GBC-SD细胞72h后能显著上调p21基因mRNA和蛋白的表达
　　2、转染 dsp21-322后，GBC-SD细胞的增殖活性明显受到抑制，细胞侵袭及迁移能力明显下降，
　　3、RNA激活技术为胆囊癌的基因治疗提供了一种新的治疗方法。

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中文摘要

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引言

材料与方法

一、实验材料

二、实验方法

结果

一 dsp21-322对胆囊癌细胞p21基因mRNA水平的影响

二 dsp21-322对胆囊癌细胞p21基因蛋白水平的影响

三 dsp21对胆囊癌细胞增殖活性的影响

四 dsp21-322对胆囊癌细胞侵袭和迁移能力的影响

讨论

结论

参考文献

致谢

附录A：中英文缩略词对照

附录B 综述： 小RNAs与原发性胆囊癌的治疗