广西H9亚型禽流感病毒全基因组序列分析及疫苗候选株的筛选

摘要

H9亚型禽流感是危害养禽业的重要疾病，在全世界均有分布，在我国主要为H9N2亚型。该病毒能够引起鸡群呼吸道、生殖系统疾病，造成生长缓慢、产蛋下降等，严重制约我国养禽业的发展。并且，H9N2亚型禽流感病毒具有直接感染人的特性，其公共卫生意义重大。
　　为了掌握广西地区H9亚型禽流感病毒的流行以及遗传变异情况，本研究对广西地区2011-2014年不同家禽和野禽进行H9亚型禽流感病毒的病原学监测，建立了H9和N2亚型禽流感二重RT-PCR的检测方法，广西株进行了分离、纯化、鉴定、全基因测序和遗传进化分析。本研究共分离并纯化了17株H9亚型禽流感病毒，其生物学特性、核苷酸和氨基酸序列都符合低致病禽流感病毒特点。其中有16个毒株具有禽型和人型两种受体亲和特性。所有分离株的HA基因与疫苗株均处于不同的遗传进化分支。17个分离株的8个基因片段大多来源不同，存在不同程度的基因重组，经分析共有4种重组模式。
　　为了评价商品化疫苗对变异毒株的免疫保护效力并筛选出免疫效力较好的H9亚型禽流感灭活疫苗候选毒株，从本研究从本实验室分离得到的39个2000-2014年H9亚型禽流感毒株中，依据进化分支的不同选择了10个代表毒株与商品化疫苗SS株进行抗原差异性分析，并依据抗原相关值从中挑选出4个分离株制成灭活油乳疫苗与商品化疫苗SS株进行交叉保护试验，证实了商品化疫苗SS株对广西变异株保护效果不理想，而A/Chicken/Guangxi/CX/2013(H9N2)株灭活疫苗能够使鸡群产生较高的抗体水平，可以抵御广西地区大部分H9亚型禽流感流行株的攻击，可以选择作为H9亚型禽流感灭活疫苗候选株。

目录

声明

摘要

第一章 文献综述

1．1 禽流感流行历史

1．2 禽流感病毒病原特征

1．2．1 病毒形态与病毒结构

1．2．2 病毒编码蛋白及其作用机制

1．2．3 禽流感病毒的抗原改变

1．3 H9亚型禽流感诊断方法研究进展

1．3．1 病原学检测

1．3．2 免疫分析技术检测

1．3．3 分子生物学技术检测

1．4 禽流感疫苗研究进展

1．4．1 全病毒灭活疫苗

1．4．2 亚单位疫苗

1．4．3 重组活载体疫苗

1．4．4 DNA疫苗

1．4．5 其他疫苗

1．5 本研究的目的与意义

第二章 H9亚型禽流感病毒的分离鉴定与生物学特性测定

2．1 材料与方法

2．1．1 材料

2．1．2 方法

2．2 结果

2．2．1 病毒的分离与HA亚型血清学鉴定

2．2．2 病毒的纯化

2．2．3 分离株基因亚型的分子生物学鉴定

2．2．4 H9亚型禽流感病毒的命名

2．2．5 分离株生物学特性的测定

2．3 讨论

第三章 H9和N2亚型禽流感病毒二重RT-PCR检测方法的建立

3．1 材料与方法

3．1．1 主要仪器和试剂

3．1．2 病毒株

3．1．3 方法

3．2 结果

3．2．1 二重RT-PCR条件的优化

3．2．2 二重RT-PCR特异性试验

3．2．3 二重RT-PCR敏感性试验

3．2．4 临床样品检测结果

3．3 讨论

第四章 17株H9N2亚型禽流感病毒全基因组序列测定及分析

4．1 材料和方法

4．1．1 材料

4．1．2 方法

4．2 结果

4．2．1 17株H9亚型禽流感病毒RT-PCR全基因扩增

4．2．2 17株H9亚型禽流感病毒基因片段的克隆及测序

4．2．3 17株H9亚型禽流感病毒全基因序列分析

4．2．4 17株H9亚型禽流感病毒基因型分析

4．3 讨论

第五章 H9亚型禽流感疫苗株的筛选及免疫效果的评价

5．1 材料与方法

5．1．1 材料

5．1．2 方法

5．2 结果

5．2．1 抗原性分析代表株的筛选

5．2．1 油乳灭活疫苗的制备

5．2．2 病毒的抗原性分析

5．2．3 疫苗交叉保护试验

5．2．4 免疫后抗体水平监测

5．3 讨论

第六章 结论

参考文献

致谢

个人简历

攻读学位期间发表论文情况