GnIH对猪卵巢颗粒细胞增殖和MAPKs信号通路活化的影响

摘要

促性腺激素抑制激素(GnIH)是在鹌鹑脑内发现的一种新型神经肽，通过其受体的介导，可以作为一种抑制剂抑制促性腺激素的合成和释放。哺乳动物的生殖功能受下丘脑-垂体-性腺轴的调控，很多研究表明GnIH参与动物的生殖调控，尤其是在卵巢，可通过与其受体结合，对卵巢组织发挥重要的直接调控作用，包括调节卵泡细胞的增殖、凋亡和激素的分泌等。本研究对猪卵巢颗粒细胞(pGCs)进行体外培养，检测不同浓度GnIH对其增殖和MAPKs信号转导通路活化的影响，为进一步研究GnIH调控pGCs的作用方式提供试验参考及理论依据。试验分为3个部分:(1)以梯度浓度(0、10-6、10-8、10-10和10-12mol/L)的GnIH作用于正常条件下体外培养的pGCs，采用CCK-8法检测各组pGCs的活力;(2)通过半定量RT-PCR方法分别检测不同浓度GnIH对pGCs增殖相关周期基因CyclinD1、CyclinA2、CyclinB1、CDK1、CDK2和CDK4的mRNA表达量的影响;(3)通过WB检测ERK1/2、p38、JNK及其磷酸化的水平检验GnIH是否影响MAPKs信号通路的活化。结果显示:(1)GnIH降低pGCs的细胞活力。(2)不同浓度的GnIH均极显著(P＜0.01)抑制CyclinD1和CDK1的表达;与对照组相比，高浓度组GnIH(10-6mol/L和10-8mol/L)可极显著(P＜0.01)抑制CydinA2、CyclinB1、CDK2和CDK4的表达。(3)不同浓度的GnIH均显著(P＜0.05)或极显著(P＜0.01)下调总ERK1/2的表达，10-12mol/L浓度下显著(P＜0.05)抑制总p38和总SAPK/JNK的表达;且GnIH在低浓度(10-10mol/L和10-12mol/L)时对p-p38和p-ERK1/2有极显著(P＜0.01)的抑制作用，在10-6mol/L和10-10mol/L时对p-SAPK/JNK有显著抑制作用(P＜0.05)。综上所述，GnIH抑制MAPKs信号通路相关蛋白的活化，参与pGCs的细胞周期调控从而影响其增殖。

目录

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论文说明

摘要

缩略语中英文对照

引言

第一章 文献综述

1．1．2 GnIH的结构

1．1．3 GnIH的分布

1．1．4 GnIH的生理功能

1．2 GCs在卵泡发育过程中的作用

1．3 MAPKs信号通路

1．3．1 MAPK蛋白家族简介

1．3．2 GCs的MAPKs信号通路研究进展

1．4 细胞周期调控与细胞增殖

1．4．1 细胞周期

1．4．2 参与细胞周期调控的因子

1．4．3 Cyclin-CDKs复合物对细胞周期的作用

1．5 本研究的目的和意义

2．1 材料

2．1．2 主要设备

2．2 方法

2．2．1 pGCs的体外培养

2．2．2 CCK-8法检测GnIH对pGCs活力的影响

2．2．3 引物设计

2．2．4 半定量RT-PCR

2．2．5 数据处理

2．3 结果

2．3．2 GnIH对pGCs细胞周期相关基因mRNA表达的影响

2．4 讨论

2．4．2 GnIH对pGCs周期相关基因表达的影响

2．5 小结

第三章 GnIH对体外培养pGCs中MAPKs信号通路活化的影响

3．1 材料

3．1．2 主要设备

3．2 方法

3．2．1 蛋白样品的制备

3．2．2 Wbstern blot

3．2．3 数据分析

3．3 结果

3．3．2 GnIH对pGCs中总p38及磷酸化p38表达的影响

3．3．3 GnIH对pGCs中总SAPK／JNK及磷酸化SAPK／JNK表达的影响

3．4 讨论

3．4．1 GCs中MAPKs信号通路的介导

3．4．2 GnIH对GCs中MAPKs信号通路活化的影响

3．5 小结

全文总结

参考文献

附录

致谢

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