胚胎干细胞中肝干细胞的筛选及在治疗性肝再生中的应用

摘要

第一部分体外诱导E14小鼠ESC分化为肝细胞的研究.目的:基于肝脏发育生物学进展,建立有效诱导胚胎干细胞(ESC)向肝细胞分化的体外培养体系.方法:小鼠ESC细胞系E14,在内含1000U/ml的rmLIF的无饲养层高糖DMEM培养基中培养,去除rmLIF后用悬滴培养法制备成拟胚体.依次加入10<'-7>M的Dexamethasone、10ug/L的FGF-4、25ug/L的HGF等诱导因子,继续培养1-2周.然后取分化细胞,行细胞形态学观察、免疫细胞化学染色检测白蛋白和CK8/18的表达、RT-PCR检测白蛋白和转甲状腺蛋白等肝细胞特征性蛋白的mRNA转录水平.糖原染色、尿素合成功能检测则对其功能进行检验.结论:1.加入FGF-4、HGF和Dex等肝脏胚胎发育时期的关键性调控因子的体外培养体系可以诱导胚胎干细胞分化为肝细胞样细胞.2.发育生物学在ESC定向诱导分化研究中有一定的指导意义.第二部分淤胆血清

目录

前言

目的和意义

研究方案

技术路线

实验主要材料、试剂和配方

第一部分 体外诱导E14小鼠ESC分化为肝细胞的研究

引言

材料与方法

结果

讨论

小结

第二部分 淤胆血清“病理微环境”下ESC中肝干细胞的筛选

引言

材料与方法

结果

讨论

小结

第三部分 ESC源性肝干细胞在治疗性肝再生中的应用

引言

材料与方法

结果

讨论

小结

本项目的特色与创新之处

主要参考文献

附图

附件

英文缩写对照

致谢

原创性声明