DMD/BMD携带者的检测及植入前遗传学诊断的初步研究

摘要

Duchenne型肌营养不良症(Duchenne muscular dystrophy,DMD)是一种以骨骼肌进行性变性、坏死为主要表现的致死性X-连锁隐性遗传病.临床上以进行性四肢近端骨骼肌无力和萎缩、伴小腿腓肠肌假性肥大为特征,同时累及心肌和呼吸肌,部分患者伴有智力障碍.该病一般3~5岁起病,6岁左右出现行走困难,12岁前丧失行走能力,20岁左右死于心力衰竭或呼吸衰竭.其发病率为1/3500男性活婴,是最常见的遗传性神经肌肉疾病.DMD发病过程目前尚不完全清楚,该病因为dystrophin基因突变造成抗肌萎缩蛋白(dystrophin)的缺乏或缺陷.dystrophin基因突变的形式有多种,其中以缺失较常见,约占65％,点突变,微小缺失约占30%,余5%来自重复.DMD迄今尚无有效的根治方法,现所采取的药物治疗、utrophin替代治疗、成肌细胞移植治疗均未能阻止DMD的进行性肌损害进程;骨髓干细胞移植治疗、基因治疗目前尚处于实验研究阶段,故及时检出携带者进行产前诊断或植入前遗传学诊断,是降低该病发病率即预防该病的最重要措施之一.

目录

文摘

英文文摘

前言

1.DMD/BMD女性携带者的检测

1.1突变类型已知的携带者诊断

1.2突变类型未知的携者诊断

2植入前遗传学诊断

2.1 PGD技术的回顾

2.2 DMD植入前遗传学诊断技术路线

2.3 DMD植入前遗传学诊断存在的问题及解决方法

2.4 DMD植入前遗传学诊断的临床应用前景

3本研究目的

材料和方法

1实验材料

1.1研究对象

1.2单个淋巴细胞

1.3单个卵裂球

1.4实验试剂

1.5实验仪器

2实验方法

2.1基因组DNA的提取

2.2多重PCR反应

2.3 PCR-STR反应

2.4半定量PCR

2.5杂合度和多态信息量(PIC)的计算

2.6三重巢式PCR

结果

1多重PCR的2％琼脂糖凝胶电泳结果

2 PCR-STR结果

2.1 PAGE-银染结果

2.2 PAGE-基因扫描结果

2.3家系1-5的系谱及STR单体型分析结果

3半定量PCR结果

3.1外显子半定量PCR结果

3.2内含子半定量PCR结果

4 DMD基因携带者诊断结果

5五个STR位点的多态性分析

5.1本组研究对象的5个STR位点的多态性分析

5.2本组研究DMD/BMD家系成员的5个STR位点多态性与西方DMD/BMD家系成员的比较

6三重巢式PCR结果

6.1单个淋巴细胞

6.2单个卵裂球

讨论

1 DMD/BMD携带者的诊断

1.1 STR多态性连锁分析进行DMD/BMD携带者的诊断的概况

1.2利用5个微卫星位点的多态性进行DMD/BMD携带者的诊断

1.3五个STR位点的多态性分析

1.4本研究所建立的STR多态性连锁分析法诊断DMD基因携带者的意义

2 DMD植入前遗传学诊断的初步研究

2.1DMD植入前遗传学诊断的概况

2.2单淋巴细胞和单卵裂球dystrophin基因和SRY基因的检测

2.3多重巢式PCR的优越性

2.4 DMD患者进行PGD的可行性分析

2.5展望

结论

创新点

参考文献

英文缩写表

在攻读博士期间发表文章

致谢

原创性声明