广州管圆线虫未知基因的筛选和功能研究及中间宿主调查

摘要

本研究采用实时荧光定量PCR的方法检测不同虫龄虫体中GAMMA-BBH的表达水平，结果发现随着广州管圆线虫虫龄的增长GAMMA-BBH的表达量逐渐增加，在第30天后的成虫体内其表达量达到高峰，随后表达水平显著下降，而在第87天时表达又呈现高水平；为了获得广州管圆线虫特异性诊断抗原，用感染血清作为免疫探针来筛选广州管圆线虫成虫cDNA文库，对获得的抗原基因进行初步交叉反应试验，发现抗原IF具有较好的特异性，并对抗原IF进行了结构和功能研究。　　本研究初次获得了广州管圆线虫特异性重组抗原，突破了虫体抗原来源的局限，为了解广州地区广州管圆线虫病暴发流行的可能性，对中间宿主的感染情况进行了调查，数据进行了统计学分析，通过实验动物模型的成功构建，对各期虫体从大小、雌性生殖器特征、雄性生殖器特征和前端特征做了详细的记录和描述。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：主要英文缩写词

前言

技术路线

第一部分广州管圆线虫成虫丰度表达基因GAMMA-BBH在不虫龄虫体表达水平的研究

材料和方法

1实验材料

2实验方法1

2实验方法2

结果

1广州管圆线虫GAMMA-BBH cDNA的生物信息学分析

2免疫鉴定结果

3原核表达载体pET-BBH的构建

4 pET-BBH在大肠杆菌中的融合表达

5重组蛋白GAMMA-BBH的质谱分析

6重组蛋白GAMMA-BBH的酶活性研究

7实时定量检测不同虫龄GAMMA-BBH的表达水平

讨论

1 GAMMA-BBH基因的确认

2 GAMMA-BBH与广州管圆线虫的生化代谢

3 GAMMA-BBH的经济价值

小结

附图1

附图2

第二部分广州管圆线虫特异性抗原基因的筛选和功能研究

材料与方法

1实验材料

2实验方法

结果

1免疫筛选结果

2初步交叉反应试验结果

3抗原IF的高级结构分析

4原核表达载体pET-IF的构建

5 pET-IF在大肠杆菌中的融合表达

6重组蛋白IF的质谱分析

7重组蛋白IF的免疫学研究

讨论

1广州管圆线虫特异性抗原IF的分析

2广州管圆线虫的抗原定位

3广州管圆线虫感染与免疫球蛋白亚类

小结

附图1

附图2

附图3

第三部分广州管圆线虫中间宿主感染调查及实验动物模型的构建

材料和方法

1材料

2方法

结果

1 2004年广州市广州管圆线虫宿主自然感染情况

2实验动物模型的构建

3广州管圆线虫四期、五期及成虫虫体特征

讨论

1褐云玛瑙螺感染广州管圆线虫情况分析

2实验动物模型的成功构建

小结

附图

全文总结

参考文献

附录

致谢

原创性声明