慢性鼻窦炎NF-κB及GATA-3与局部细胞因子表达的相关性及激素干预的研究

摘要

慢性鼻窦炎的发病机制十分复杂，既往的研究提示细胞因子在该病的发生、发展中起着至关重要的作用。但是，目前有关鼻窦黏膜局部细胞因子表达的分子机制尚不十分清楚。近年已有不少研究显示转录因子是多种细胞因子表达的调控者，其中尤以核转录因子-kappaB(nuclearfactor-kappaB，NF-κB)及GATA-3为重要。 本实验拟通过检测慢性鼻窦炎筛窦黏膜组织中NF-κB和GATA-3的活性及细胞因子(IL-5、IL-6和IL-8)的表达水平，探讨NF-κB、GATA-3的活性与这三种细胞因子表达的关系，为进一步揭示慢性鼻窦炎的发病机制提供一定的理论基础；同时探讨糖皮质激素治疗对NF-κB及IL-6与IL-8的影响，试图为慢性鼻窦炎应用糖皮质激素治疗提供初步的实验依据。 一、慢性鼻窦炎NF-κB活性与局部IL-6及IL-8表达的关系 采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测52例慢性鼻窦炎与12例正常筛窦黏膜组织中1L-5、IL-6及IL-8含量。根据是否伴有变应性鼻炎(AR)，将慢性鼻窦炎分为AR组与NAR组。变应性鼻炎的诊断是依据海口标准、变应原特异性抗体检测(法码西亚UniCap试验)血清总IgE≥60KU/L及吸入性过敏原过筛试验(+)。半定量RT-PCR和免疫组织化学法检测NF-κB亚单位P50、P65在鼻-鼻窦黏膜的表达及活性，分析NF-κB各亚单位的活性与IL-5、IL-6及IL-8含量间的相关性。 AR组与NAR组筛窦黏膜中IL-5、IL-6、IL-8水平均显著高于正常组(AR组P值均＜0.01；NAR组P值分别＜0.05、0.05、0.01)；AR组的3种细胞因子水平均明显高于NAR组(P值分别＜0.01、0.05、0.01)。半定量RT-PCR显示AR组与NAR组P50、P65的mRNA表达水平均显著高于正常组(AR组P值均＜0.01；NAR组P值均＜0.05)；AR组明显高于NAR组(P值分别＜0.05，0.01)。免疫组化显示AR及NAR两组P50、P65核染阳性率均显著高于正常组(P均＜0.01)；AR组较NAR组更高P均＜0.01)。Pearson相关性分析显示P50、P65核染阳性率与局部IL-6、IL-8水平存在显著相关性，其中P50与IL-6、IL-8的相关系数分别为0.49与0.54(P均＜0.01)；P65与两者的相关系数分别为0.61与0.66(P均＜0.01)。P50、P65核染阳性率与IL-5间无明显相关性。 慢性鼻窦炎炎性黏膜中NF-κB的P50、P65两亚单位的核转位及活化是诱导局部IL-6、IL-8表达的可能机制之一，AR的并存可以进一步提高NF-kB活性，进而增加局部IL-6、IL-8的表达。IL-5的局部表达不依赖于NF-κB途径。 二、慢性鼻窦炎转录因子GATA-3在IL-5表达中的作用 采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测45例慢性鼻窦炎筛窦黏膜与11例正常筛窦黏膜组织中IL-5、IL-6、IL-8的含量。其中AR组28例，NAR组17例。半定量RT-PCR和免疫组织化学法检测GATA-3在鼻窦黏膜的表达，分析GATA-3表达与细胞因子含量间的相关性。 三组筛窦黏膜中AR组与NAR组的3种细胞因子水平均显著高于正常组(AR组P均＜0.01；NAR组P分别＜0.05，0.05，0.01)；AR组的3种细胞因子水平均显著高于NAR组(P分别＜0.01，0.01，0.01)。 半定量RT-PCR所得的相对密度显示AR组和NAR组的GATA-3mRNA水平明显高于正常对照组(两者均P＜0.01)，同时AR组的GATA-3mRNA水平亦显著高于NAR组(P＜0.01)。 免疫组化结果显示GATA-3的表达主要存在于细胞浆内且GATA-3阳性细胞主要为黏膜下的炎症浸润细胞。平均胞浆染色阳性率AR组为(27.9±16.75)％，NAR组为(10.22±0.05)％，正常对照组为(1.30±1.78)％。统计学分析AR组和NAR组的慢性鼻窦炎患者GATA-3的胞浆阳性率显著高于正常组(P均＜0.01)，AR组又较NAR组明显增高(P＜0.01)。 Pearson相关性分析结果显示GATA-3的胞浆染色阳性率与鼻窦炎患者局部IL-5水平之间存在显著相关性，相关系数为r=0.712(P＜0.01)。GATA-3的胞浆染色阳性率与IL-6、IL-8缺乏相关性(相关系数分别为0.200与0.089，P均＞0.05)。 我们的结果表明慢性鼻窦炎中GATA-3激活是诱导局部IL-5表达的可能机制之一，变应性鼻炎的存在可以进一步提高GATA-3的活性，进而增加局部IL-5的表达。说明慢性鼻窦炎的发生发展与变态反应有一定的关系，GATA-3在慢性鼻窦炎的发病机理中可能是关键因素之一，可以作为一个治疗的靶点，抑制GATA-3的活性在治疗上、下呼吸道与变态反应有关的疾病中可能会起到积极的作用。 三、糖皮质激素对慢性鼻窦炎NF-κB的活性及细胞因子表达的影响 本实验包括26例入院前至少两周未使用全身或局部糖皮质激素的慢性鼻窦炎患者。手术中常规取筛窦黏膜标本。手术后1～3天静脉滴注地塞米松10毫克/天，4～7天地塞米松减量至5毫克/天。手术后第2周口服强的松30毫克/每天；第3周强的松减为15毫克/每天。术后鼻腔局部连续使用布地奈德鼻喷雾剂治疗30天，二喷(128ug)/鼻/天。术后30天鼻内镜下换药时获取筛窦黏膜标本。 采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测26例慢性鼻窦炎患者激素干预前和干预30天后的筛窦黏膜组织中IL-6、IL-8含量，免疫组织化学法和半定量RT-PCR检测NF-κB亚单位P50、P65在筛窦黏膜的活性及表达，分析NF-κB各亚单位的活性与IL-6及IL-8含量间的相关性。 激素干预前筛窦黏膜中IL-6和IL-8的含量分别是(20.38±20.27)pg/mg和(414.34±503.46)pg/mg，干预后两细胞因子的含量分别是(6.49±11.10)pg/mg和(78.01±88.10)pg/mg。激素干预前较干预后的2种细胞因子水平均显著增高(P值均＜0.01)。 半定量RT-PCR检测干预前、干预后P65、P50的相对密度，可见两组P50、P65的mRNA表达水平无显著性差异(P均＞0.05)。v免疫组化显示激素干预后NF-κB的P50、P65表达主要位于上皮细胞的细胞浆内，而不是位于细胞核内，随着激素作用时间的延长，上皮细胞胞核中的阳性染色可能会逐渐减少；黏膜下层有嗜酸粒细胞、中性粒细胞、淋巴细胞与浆细胞等炎症细胞浸润，但P50、P65阳性者很少。结果显示激素干预前筛窦黏膜P50、P65核染阳性率显著高于干预后(P均＜0.01)。两组p50为(13.9±16.1)％vs(0.0±0.0)％(P＜0.01)、p65为(26.9±19.1)％vs(5.1±10.5)％(P＜0.01)。 本研究结果表明，慢性鼻窦炎激素干预前后NF-κB的P50、P65两亚单位的mRNA水平没有明显变化，但两者在胞核内的表达逐渐减少，同时IL-6、IL-8的含量亦受到明显抑制。研究提示了糖皮质激素可能通过增加IκB的表达来降低NF-κB的激活，从而调控局部IL-6、IL-8转录和表达。

目录

文摘

英文文摘

前言

第一章慢性鼻窦炎黏膜NF-κB活性与局部IL-6及IL-8表达的关系

第二章慢性鼻窦炎组织中转录因子GATA-3活性与IL-5表达的关系

第三章糖皮质激素对慢性鼻窦炎NF-κB的活性及细胞因子表达的影响

结束语

参考文献

博士在读期间发表论文

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