两歧双歧杆菌微胶囊制备关键技术的研究

摘要

双歧杆菌(Biftdobacterla)是人消化道内重要的生理性细菌，具有防治肠道感染、调节人体免疫、抗肿瘤作用等多种生物学功能，对人体的健康有重要作用。双歧杆菌已广泛用于食品和微生态制药方面。但是，由于双歧杆菌是专性厌氧菌，对营养要求高，对低pH值的抵抗力差，这限制了双歧杆菌制品的开发和应用。 本研究以两歧双歧杆菌(Bifidobacteria bifidum)为研究对象，对两歧双歧杆菌进行耐氧耐酸驯化筛选，从而获得有利于生产应用的菌株，并对该菌株的发酵培养基、发酵条件、冻干保护剂、冻干工艺和微囊化工艺进行研究优化，最终制得耐酸肠溶型两歧双歧杆菌微胶囊。 1．通过多次将两歧双歧杆菌暴露于氧中来驯化获得耐氧两歧双歧杆菌菌株，然后再通过逐步降低培养基pH值来筛选出耐酸的菌株，从而得到对氧和酸的耐受能力有一定提高的两歧双歧杆菌菌株。 2．采用SAS软件的响应面方法对两歧双歧杆菌的培养基进行了优化。首先应用Plackett-Burman设计法筛选影响两歧双歧杆菌生长的重要营养因素，再应用最陡爬坡实验法逼近最大响应区域，利用Box-Benhnken的中心组合设计及响应面分析确定主要影响因子酵母膏、低聚果糖、半胱氨酸盐酸盐的最佳浓度。用响应面分析法求得培养基的最佳组合为：酵母膏 1.63％，低聚果糖0.13％，半胱氨酸盐酸盐0.0076％，酪蛋白胨1．0％，大豆蛋白胨0．5％，葡萄糖0．5％，@Nso 0．1％，K2HP040．2％，MgCl<,2>·6H<,2>O0.05％，CaCl<,2>0.015％，ZnSO<,4>·7H<,2>O0.025％，FeCl<,3>0.01％，pH6.5。 3．对两歧双歧杆菌的发酵培养条件进行研究，确定的最佳的发酵工艺为： 培养基灭菌后通入氮气保持罐压0.1Mpa，种龄为12小时，接种量为8％，培养温度为37℃，搅拌速度为50转/分钟，当培养基pH降到6.0时，加碱将pH控制在6.5±0.2的范围，培养18小时后放罐离心收集菌体。 4．通过单因素试验和正交设计法对两歧双歧杆菌菌体冻干的保护剂进行优化，获得在冻干过程中能有效保护两歧双歧杆菌存活的复合保护剂，再对菌悬液共晶点的测定和冻干工艺进行研究。获得最佳冻干工艺为：用8％海藻糖+2％甘油+0.08％半胱氨酸盐酸盐+6％脱脂奶的复合物作为两歧双歧杆菌的冻干保护剂，两歧双歧杆菌和保护剂混合均匀后，分装托盘，菌悬液厚度为1cm。将冻干机的冻干箱先预冷到-35℃，再将菌悬液装入冻干箱内，当样品温度达到-35℃，保持此温度2小时，然后在温度为-32℃和真空度为10-30Pa的条件下进行升华干燥，样品的干燥进入了解吸干燥阶段时将解吸干燥温度设为25℃，样品温度已达到设定的解吸干燥温度后保持4小时，结束冻干。 5．选用耐酸肠溶性囊材羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯(HPMCP)，对两歧双歧杆菌冻干菌粉的微囊化工艺进行研究。优化的微囊化两歧双歧杆菌工艺是用蠕动泵以20ml/min的流速将 10％囊材液加入流化床内，包囊温度控制在37℃，流化床空气流速为12 M<'3>/h。用此微囊化工艺制备的两歧双歧杆菌微胶囊具有良好的耐酸性和肠溶性。

目录

文摘

英文文摘

论文说明:缩略词表

声明

第1章前言(含文献综述)

1.1双歧杆菌的发现

1.2双歧杆菌的分类

1.3双歧杆菌的特性

1.4双歧杆菌对人体的生理功能

1.5双歧杆菌的分离、鉴定和培养技术

1.6双歧杆菌制品的开发与应用

1.7双歧杆菌制剂存在的问题及研究方向

1.8本研究的目的、意义和内容

第2章两歧双歧杆菌耐氧耐酸优良菌株的选育

2.1材料

2.2实验方法

2.3结果与分析

2.4讨论

2.5小结

第3章两歧双歧杆菌发酵培养基的优化

3.1材料

3.2试验方法

3.3结果与分析

3.4讨论

3.5小结

第4章两歧双歧杆菌发酵培养条件的优化

4.1材料

4.2试验方法

4.3结果与分析

4.4讨论

4.5小结

第5章两歧双歧杆菌的真空冷冻干燥工艺研究

5.1材料

5.2试验方法

5.3结果与分析

5.4讨论

5.5小结

第6章两歧双歧杆菌的微囊化工艺研究

6.1材料

6.2试验方法

6.3结果与分析

6.4讨论

6.5小结

全文总结

参考文献

致谢