复发性急性白血病患者血清和骨髓基质细胞培养上清液VCAM-1水平变化以及临床意义探讨

摘要

急性白血病(acute leukemia，AL)是造血干细胞的恶性克隆性疾病，发病时骨髓中异常的白血病细胞大量增殖，并广泛浸润其他器官和组织，导致正常造血受到抑制。随着对急性白血病的进一步认识、化疗方案的改进以及支持治疗的加强，目前急性白血病的治疗已经取得了很大的进步。但急性白血病复发至今仍是治疗过程中的难题，研究发现许多黏附分子的异常与急性白血病的复发有着密切的关系。血管细胞黏附分子1(vascular cell adhesion molecule 1，VCAM-1)是一种重要的细胞黏附分子，可介导细胞与细胞、细胞与细胞外基质之间的黏附、参与造血细胞的发育、刺激T细胞的活化增殖等。有学者发现VCAM-1升高能通过激活PI3K依赖的信号转导途径增强白血病细胞的增殖；也有研究表明骨髓基质细胞和急性B细胞白血病细胞共培养时可促进白血病细胞的增殖，而用单克隆抗体封闭VCAM-1后骨髓基质细胞的这种作用也随之减弱。但目前对VCAM-1与急性白血病复发的相关性研究仍较少。 骨髓由造血干细胞(HSCs)和骨髓造血微环境组成，构成骨髓造血微环境的主要是骨髓基质细胞，而骨髓基质细胞由成纤维细胞、内皮细胞、脂肪细胞和巨噬细胞组成，具有支持造血和免疫调节的功能，并可分泌细胞因子、黏附分子调节造血细胞的增殖。VCAM-1是骨髓基质细胞表达的主要黏附分子之一。国内外学者都提出急性白血病患者不仅造血干细胞存在异常，而且骨髓微环境中的骨髓基质细胞表达黏附分子VCAM-1功能可能也存在异常；另外也有研究发现急性白血病外周血中VCAM-1也出现异常，但是急性白血病患者复发期和缓解期血清和骨髓基质细胞表达VCAM-1的表达水平如何；是否和急性白血病复发具有一定的相关性，目前这方面的文献报道罕见。本实验希望通过对急性白血病患者复发期和缓解期血清和骨髓基质细胞培养上清液中VCAM-1水平的研究，探讨VCAM-1的表达水平和急性白血病复发是否具有相关性，以便为急性白血病复发的治疗提供新的思路和方法。 材料和方法： 1.材料 1.1标本来源：血清和骨髓标本均来源于在我院血液科住院期间的急性白血病患者(经过患者同意后)。 1.2，采集时间：2006年6月至2008年3月。 1.3，采集时期：在17例急性白血病患者复发期和缓解期分别采集标本，血清标本17例，其中能完整做骨髓基质细胞培养的标本11例。 1.4，符合条件：以上患者诊断均符合2007年8月张之南、沈悌主编的第三版《血液病诊断及疗效标准》关于急性白血病的诊断标准以及复发和缓解的诊断标准。 2.实验步骤和方法 2.1血清标本的采集：取符合条件的患者外周静脉血3ml，于6小时内分离血清，-20℃冻存待用。 2.2，骨髓标本的采集：取符合条件的患者骨髓液3ml(肝素抗凝20IU/ml)，于6小时内用密度离心法分离单个核细胞(MNCs)，并应用骨髓基质细胞培养法进行连续4周的细胞培养，观察细胞生长的情况，并分别于第一、三、四周取其上清液，-20℃冻存待用。 2.3，用双抗体酶联免疫吸附法(ELISA法)对上述血清、骨髓基质细胞培养上清液标本中的VCAM-1进行检测。 3.统计方法： 实验数据以Means±Sd表示，组间比较采用随机化配对设计的t检验和方差分析，以上均采用SPSS11.0统计软件包完成。 结果： 1.在体外进行骨髓基质细胞培养的生长过程：复发组和缓解组骨髓基质细胞在培养第一周时出现；在第二至三周时，基质细胞逐渐增多；第四周时细胞生长旺盛，铺满90％以上的培养瓶底，部分融合成片。 2.急性白血病患者复发组血清中VCAM-1水平高于缓解组，并具有统计学意义。 3.复发组第四周骨髓基质细胞培养液VCAM-1水平高于缓解组，并具有统计学意义。 4.随着培养时间的增加，复发组和缓解组第四周骨髓基质细胞培养上清液VCAM-1水平明显均高于第一、三周，并具有统计学意义。 结论： 1.随着培养时间的增加，骨髓基质细胞培养上清液VCAM-1水平逐渐增加。 2.复发组急性白血病患者血清VCAM-1水平明显高于缓解组。 3.复发组第四周骨髓基质细胞培养上清液VCAM-1水平明显高于缓解组。 4.VCAM-1可能参与急性白血病的复发，与疾病的复发可能具有一定的相关性。

目录

文摘

英文文摘

声明

第一章前言

第二章材料和方法

第三章结果

第四章讨论

第五章结论

参考文献

附录

致谢