盐酸小檗碱对脂多糖诱导的小鼠RAW264.7巨噬细胞的PGE、COX-2表达的影响

摘要

本实验研究盐酸小檗碱对脂多糖(LPS)诱导的小鼠RAW264.7巨噬细胞的生长增殖的影响以及盐酸小檗碱对LPS诱导的小鼠RAW264.7巨噬细胞的PGE2、COX-2表达的影响。探讨盐酸小檗碱的抗炎作用机制。 方法及结果： 一、盐酸小檗碱对LPS诱导的小鼠RAW264.7巨噬细胞生长增殖的影响 方法：MTT比色试验法观察盐酸小檗碱对LPS诱导的小鼠RAW264.7巨噬细胞的生长增殖的影响。 结果：盐酸小檗碱在浓度为5-1000μmol/L时对LPS诱导的小鼠RAW264.7巨噬细胞的生长增殖有抑制作用，且呈剂量依赖性。随着盐酸小檗碱浓度的增加，细胞抑制率增加。当盐酸小檗碱的浓度为5-100μmol/L时，抑制率较低，小鼠RAW264.7细胞透亮，细胞呈梭形或多角形；当其浓度为500—1000μmol/L时细胞抑制率高达48.23％，细胞出现核浓缩，靠边，甚至出现破裂。 二、盐酸小檗碱对LPS诱导的小鼠RAW264.7巨噬细胞产生的PGE2浓度的影响 方法：酶联免疫法检测盐酸小檗碱对LPS诱导的小鼠RAW264.7巨噬细胞的PGE2浓度的影响结果：盐酸小檗碱在10、50、100μmol/L浓度时可以降低LPS诱导的小鼠RAW264.7巨噬细胞产生的PGE2的浓度，并且呈剂量依赖性，PGE2的浓度随盐酸小檗碱的作用浓度升高而降低。当盐酸小檗碱的浓度为10、50、100μmol/L时，小鼠RAW264.7巨噬细胞的PGE2的浓度分别为708.67±44.96、625.67±25.54、495.33±25.5pg/mL，与模型组的PGE2的浓度(960.67±76.85pg/mL)相比有显著性差异。 三、盐酸小檗碱对LPS诱导的小鼠RAW264.7巨噬细胞COX-2mRNA表达的影响 方法：采用逆转录-聚合酶链反应方法检测盐酸小檗碱对LPS诱导的小鼠RAW264.7巨噬细胞COX-2mRNA表达的影响。 结果：LPS刺激小鼠RAW264.7细胞9h后COX-2mRNA表达明显增强。阳性对照组消炎痛(0.125μmol/L)处理组的COX-2mRNA表达明显降低，说明消炎痛可以在基因水平抑制COX-2的表达。但是10、50、100μmol/L浓度的盐酸小檗碱对LPS诱导刺激的小鼠RAW264.7细胞产生的COX-2mRNA表达没有抑制作用，提示盐酸小檗碱对COX-2的基因转录没有影响。 四、盐酸小檗碱对LPS诱导的小鼠RAW264.7巨噬细胞COX-2的蛋白表达的影响 方法：免疫印迹法检测盐酸小檗碱对LPS诱导的小鼠RAW264.7巨噬细胞COX-2蛋白表达的影响。 结果：Westernblotting结果显示，正常对照组没有COX-2蛋白条带的表达。终质量浓度为1mg/L的LPS处理细胞后，COX-2蛋白条带明显变粗。与LPS组比较，消炎痛处理组的COX-2蛋白表达减少；盐酸小檗碱各剂量组的COX-2蛋白条带与LPS组的蛋白条带相比没有明显的变化。结果表明盐酸小檗碱对LPS诱导的小鼠RAW264.7巨噬细胞产生的COX-2的蛋白表达没有影响。 结论： 1.盐酸小檗碱对LPS诱导的小鼠RAW264.7巨噬细胞的生长增殖有抑制作用。 2.盐酸小檗碱降低LPS诱导的小鼠RAW264.7巨噬细胞产生的PGE2的浓度。 3.盐酸小檗碱对LPS诱导的小鼠RAW264.7巨噬细胞COX-2mRNA及COX-2蛋白表达均没有明显影响。表明盐酸小檗碱不是通过抑制COX-2的生成途径来影响PGE2的生成的。

目录

文摘

英文文摘

声明

前言

第一部分　实验材料和方法

一、小鼠RAW264.7巨噬细胞的培养及MTT比色试验法

二、酶联免疫法(ELISA)测定盐酸小檗碱对LPS诱导的小鼠RAW264.7巨噬细胞产生的PGE2浓度的影响

三、逆转录-聚合酶链反应方法(RT-PCR)测定盐酸小檗碱对LPS诱导的小鼠RAW264.7巨噬细胞COX-2的基因表达的影响

四、免疫印迹法(Western blotting)测定盐酸小檗碱对LPS诱导的小鼠RAW264.7巨噬细胞COX-2的蛋白表达的影响

第二部分　实验结果

一 MTT比色试验方法观察盐酸小檗碱对小鼠RAW264.7巨噬细胞生长增殖的影响

二 酶联免疫法(ELISA)测定盐酸小檗碱对LPS诱导的小鼠RAW264.7巨噬细胞产生的PGE2浓度的影响

三 采用逆转录-聚合酶链反应方法(RT-PCR)测定盐酸小檗碱对LPS诱导的小鼠RAW264.7巨噬细胞COX-2的基因表达的影响

四 免疫印迹法(Western blotting)测定盐酸小檗碱对LPS诱导的小鼠RAW264.7巨噬细胞COX-2的蛋白表达的影响

讨 论

结 论

参考文献

附录

致谢