抗炎合剂通过TLR4/MyD88/NF-κB通路抑制脂多糖诱导的过表达高迁移率蛋白-1转染小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞炎症反应的机制研究

摘要

目的 研究抗炎合剂对脂多糖(LPS)诱导的过表达高迁移率蛋白-1(HMGB1)慢病毒转染的小鼠巨噬细胞系RAW264.7的炎症反应中Toll样受体4/髓样分化因子/核转录因子-κB(TLR4/MyD88/NF-κB)信号通路的调控作用.方法 对10只SD雄性大鼠分别予抗炎合剂9.9 g/kg灌胃7 d后,腹主动脉采血制备含药血清.将RAW264.7细胞分为空白对照组、LPS组、LPS+中药血清组,将过表达HMGB1慢病毒转染的RAW264.7细胞分为LPS+HMGB1组、LPS+HMGB1+中药血清组,将HMGB1 RNAi慢病毒转染的RAW264.7细胞分为LPS+HMGB1 RNAi组、LPS+HMGB1 RNAi+中药血清组,以上7组分别进行相应的干预处理.观察干预前后RAW264.7细胞、过表达HMGB1慢病毒转染的RAW264.7细胞及HMGB1 RNAi慢病毒转染的RAW264.7细胞的形态学变化.酶联免疫吸附(ELISA)法检测各组细胞上清肿瘤坏死因子 α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素10(IL-10)水平,实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)法检测各组细胞TRL4 mRNA、MyD88 mRNA、NF-κB mRNA表达量.结果 干预后镜下可见,各不同干预组之间细胞分化区别较为明显,空白对照组细胞无分化,LPS组、LPS+HMGB1组细胞分化程度较高,LPS+中药血清组、LPS+HMGB1 RNAi组、LPS+HMGB1+中药血清组、LPS+HMGB1 RNAi+中药血清组细胞分化程度略低.与空白对照组比较,LPS组、LPS+HMGB1组、LPS+HMGB1+中药血清组中IL-6、IL-10、TNF-α水平及TLR4 mRNA、MyD88 mRNA、NF-κB mRNA表达量均明显升高(P<0.05).与LPS组比较,LPS+HMGB1组IL-6、IL-10、TNF-α水平及TLR4 mRNA、MyD88 mRNA、NF-κB mRNA表达量均升高(P<0.05);LPS+HMGB1 RNAi组IL-6、IL-10、TNF-α水平及TLR4 mRNA、MyD88 mRNA、NF-κB mRNA表达量均降低(P<0.05);LPS+中药血清组IL-6、TNF-α水平及TLR4 mRNA、MyD88 mRNA、NF-κB mRNA表达量均明显降低(P<0.05),IL-10水平明显升高(P<0.05).与LPS+HMGB1组比较,LPS+HMGB1+中药血清组中IL-6、TNF-α水平及TLR4 mRNA、MyD88 mRNA、NF-κB mRNA表达量均明显降低(P<0.05),IL-10水平明显升高(P<0.05).与LPS+HMGB1 RNAi组比较,LPS+HMGB1 RNAi+中药血清组中IL-6、TNF-α水平及TLR4 mRNA、MyD88 mRNA、NF-κB mRNA表达量均明显降低(P<0.05),IL-10水平明显升高(P<0.05).结论 HMGB1过表达可显著增强LPS诱导的小鼠巨噬细胞系RAW264.7的炎症反应,抗炎合剂能够抑制该炎症反应,其机制可能与下调TLR4/MyD88/NF-κB通路,减少促炎因子、增加抗炎因子释放有关.