己酮可可碱对血管球囊损伤后胶原增生及血管重塑的影响

摘要

背景与目的:经皮腔内血管成形术和支架植入术是目前治疗血管狭窄的有效手段,但术后3-6个月30％-50%的再狭窄率是目前临床急需解决的问题。血栓的形成、早期的内膜增生及晚期的血管重塑构成了血管成形术后再狭窄的病理过程。此过程中,外膜成纤维细胞被激活,发生转型、迁移、增殖、分泌胶原而导致的血管限制性重塑被认为起着关键的作用。本课题建立兔髂总动脉球囊损伤模型,研究已酮可可碱(PTX)对再狭窄这一病理变化的影响,探讨PTX预防再狭窄的可能机制。
　　材料与方法:取健康成年雄性新西兰白兔75只,随机化分得3大组:(1)假手术组(n=15);(2)单纯球囊损伤组(n=30):仅接受球囊过度扩张损伤术;(3)PTX治疗组(n=30):PTX治疗组自术前一天起腹腔注射PTX42mg/kg/day直至取材。每大组中再随机平分成3个亚组,1周组、4周组及12周组。实验动物术前及取材前,经耳缘静脉采血测定血浆纤维蛋白原浓度。取材后行形态学分析,测定管腔面积(LA)及总血管面积即外弹力层包绕的面积(EEL),分别作为狭窄程度及收缩性重构的指标;免疫组织化学high-SABC法检测细胞核增殖抗原(PCNA)、α-肌动蛋白(α-SMA)的表达,观察细胞增殖情况及细胞的转型;胶原纤维特殊染色(VG染色),测定平均灰度值,观察胶原增生及分布情况。
　　结果:(1)血管形态:球囊组与用药组均可见内弹力板断裂,新生内膜增生,LA变小,但术后4周及12周时,用药组较球囊组平均分别增加了27%(1.12±0.22mm2 vs.0.88±0.19 mm2 at week4;P<0.05)与58%(0.95±0.27mm2 vs.0.60±0.14mm2 at week12;P<0.01),而EEL则平均分别增加了25%(2.15±0.31mm2 vs.1.72±0.30mm2 at week4;P>0.05)及51%(1.91±0.28mm2 vs.1.27±0.34mm2 at week12;P<0.01),球囊组LA与EEL的相关系数为为r4w=0.48及r12w=0.85,两者比较P<0.05。
　　(2)细胞的增殖:术后1周时,外膜及内膜均有大量PCNA阳性细胞,用药组外膜的增殖指数平均为0.67±0.05,而球囊组为0.95±0.03,P<0.01,球囊组新生内膜的增殖指数同样较用药组显著增高(0.98±0.02vs.0.76±0.11;P<0.01)。术后4周时两者外膜不见阳性细胞,而新生内膜细胞增殖指数仍具有统计学差异,分别为0.04±0.02及0.10±0.04,P<0.05。术后12周时,两组血管均几乎不见PCNA阳性细胞存在。
　　(3)细胞的转型:用药组术后1周时外膜α-SMA染色的阳性细胞百分比率较球囊组平均减少约17%,(0.18±0.07 vs.0.35±0.10;P<0.01),而术后4周及12周时外膜α-SMA阳性细胞均消失,新生内膜则聚集了大量α-SMA阳性细胞,在4周时,用药组比球囊组平均减少18%,(0.55±0.14vs.0.73±0.15;P<0.01)。
　　(4)胶原的增生:术后4周球囊组VG染色可见外膜胶原纤维断裂,排列紊乱,较用药组外膜胶原显著增生,胶原平均灰度值升高(24.36±2.68 vs.21.40±3.46 at week4;P<0.05 and34.06±2.81vs.24.97±2.69 at week12;P<0.01)。用药组新生内膜平均灰度值均分别较同期球囊组低(7.31±3.50 vs.9.86±3.82 at week4;P<0.05 and8.05±2.14 vs.11.79±3.12 at week12;P<0.01)
　　(5)血浆纤维蛋白原浓度:假手术组动物血浆纤维蛋白原浓度无明显变化。行球囊损伤后,动物血浆纤维蛋白原浓度升高,以1周时最高。球囊组术后1周较术前平均升高了约0.67±0.19umol/L,P<0.01,PTX组平均升高了0.11±0.02umol/L,P<0.05,球囊组与用药组之间进行比较,P<0.01。球囊组在术后4周时血浆纤维蛋白原浓度已明显下降。用药组术后4周及球囊组术后12周的血浆纤维蛋白原浓度与术前比较无差别。
　　结论:
　　1、球囊过度扩张损伤动脉血管后,血管外膜成纤维细胞激活,增殖活性增强,并表达α-SMA转型成肌成纤维细胞,大量分泌胶原纤维,与血管损伤后晚期狭窄的发生关系密切;新生内膜细胞亦产生胶原,但其含量的改变不及外膜显著。
　　2、己酮可可碱能通过抑制外膜成纤维细胞的增殖、向肌成纤维细胞的转型及分泌胶原而改善血管损伤后的血管限制性重塑,此外,PTX对新生内膜胶原的含量亦有明显抑制作用。PTX对血管损伤后狭窄这一病理过程,尤其是晚期狭窄有显著的干预作用。
　　3、血浆纤维蛋白原水平在球囊损伤血管后显著上升,已酮可可碱对血浆纤维蛋白原的抑制可能起了保护性作用。

目录

目录

中文摘要

英文摘要

前言

材料与方法

1 材料

2. 方法

结果

1、 形态学改变：

2、细胞的增殖：

3、 细胞的转型

4、血管壁胶原的增生情况：

5、 血浆纤维蛋白原浓度的变化

讨论

一、传统再狭窄机制面临质疑

二、血管损伤后重塑的有关机制

三、PTX用于改善血管重塑的基础

四、PTX对血管损伤后VAF的增殖及转型的干预

五、PTX对血管损伤后胶原增生及晚期限制性重塑的影响

六、 PTX对新生内膜的抑制作用

七、 血浆纤维蛋白原浓度与血管损伤后狭窄的关系

八、 关于PTX的应用

结论

参考文献

附录：本文主要英文缩略词表

参考文献

致谢