TGF-β3基因转染成纤维细胞对深II度大鼠烫伤模型创面愈合的影响

摘要

背景与目的：创面愈合是一个复杂的过程,已知有众多的细胞因子参与这一过程, TGF-β是其中最重要的细胞因子之一。本实验采用大鼠深II度烫伤模型,构建含TGF-β3 cDNA的PLASTN质粒,转染受体成纤维细胞,移植于创面。同时采用EGF及磺胺嘧啶银粉作为治疗药物,观察深II度烫伤大鼠创面的组织形态学变化,创面愈合率,创面含水量及其TGF-β1,TGF-β2及TGF-β3蛋白在创面组织的表达情况;评估深II度烫伤模型继续作为进一步转基因动物实验研究模型的可行性;探讨TGF-β3基因转染的成纤维细胞在创面愈合中的影响。
　　材料与方法：清洁级成年Wistar大鼠90只,随机分为3组,模型对照组、表皮转化生长因子组和TGFβ3转基因成纤维细胞组。麻醉大鼠,将皮肤浸泡在80℃水中15s。1) C组:在烫伤后不同时间点将创面描记在半透明纸上,然后创面外用磺胺嘧啶银粉;2) EGF组:处理同对照组外,创面外用20μg/L EGF;3)TGF-β3组:处理同对照组外,创面用含 TGF-β3转基因成纤维细胞。烫伤后不同时间分别活杀,取烫伤区域全层皮肤, HE染色观察创面组织变化,用半透明纸法折算创面愈合率,用干湿重法计算创面含水量,SP法观察大鼠烫伤皮肤组织中TGF-β1、β2及β3的表达情况,用图像分析软件测定TGF-β1、β2及β3的平均光密度值。并采用方差分析、相关分析对上述指标进行统计分析。
　　结果：①动物情况及创面观察:烫伤后一两天银粉组创面稍有肿胀,可见少量渗出及创周红肿。②创面愈合率比较:烫伤后7天,愈合率EGF组> TGF-β3组>银粉组。烫伤后14天,愈合率TGF-β3组>EGF组>银粉组。烫伤后21天,愈合率TGF-β3组>EGF组>银粉组。③创面含水量比较:烫伤后21天TGF-β3组与银粉组之间有显著差异性。④病理组织学观察:烫伤1天组织切片可见典型深II度烫伤创面,烫伤后14天,结缔组织成纤维细胞明显增生,EGF组及TGF-β3组痂皮下开始有上皮生长;烫伤后21天,组织内仍可见少量炎症细胞浸润。⑤TGF-β1在皮肤组织表达结果:烫伤后7天,EGF组与TGF-β3组之间有显著差异性;烫伤后14天,银粉组、EGF组与TGF-β3组之间差异有显著性;烫伤后21天,银粉组、EGF组与TGF-β3组之间有显著差异性。⑥TGF-β2在皮肤组织表达结果:烫伤后7天,14天,银粉组、EGF组与TGF-β3组之间差异有显著性。烫伤后21天,银粉组、EGF组与TGF-β3组之间有显著差异性。⑦TGF-β3在皮肤组织表达结果:烫伤后1天、3天、7天、14天及21天,TGF-β3组与银粉及EGF组之间均有显著差异性。⑧相关分析结果表明:创面面积愈合率与TGF-β3的MOD值呈正相关;而其与创面含水量、TGF-β1的MOD值、TGF-β2的MOD值呈负相关。
　　结论：①本实验制作深大鼠II度烫伤模型的方法简便,重复性好。②本次实验采用创面愈合率作为衡量愈合面积的指标,反映了三个组在不同烫伤时间内的不同愈合情况。③TGF-β1、β2及β3主要表达于成纤维细胞的胞浆及胞膜。MOD值较准确地反映了上述三个指标表达的情况。④TGF-β1、β2在TGF-β3组的表达明显低于银粉组与EGF组, TGF-β3组的创面愈合率明显高于银粉组与EGF组,说明TGF-β3转基因转染成纤维细胞可能通过在创面上持续分泌TGF-β3蛋白,下调TGF-β1及TGF-β2的表达。

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第 1 章 前 言

第 2章 材 料 与 方 法

2.1 材料来源

2.2 实验步骤

2.3 创面大体观察：

2.4 模型给药及取材：

2.5 创面愈合程度表示：

2.6 烫伤创面含水量测定：

2.7 光镜观察：

2.8 免疫组化染色观察：

第 3 章 结 果

3.1 动物情况及创面观察

3.2 创面愈合率比较（见表1）。

3.3 创面含水量比较（见表2）。

3.4 病理组织学观察 （见附图）

3.5 TGF-β1、TGF-β2及TGF-β3在皮肤组织的表达部位观察（见附图）

3.6 相关分析结果

第 4 章 讨 论

4.1 创面愈合概述

4.2 磺胺嘧啶银粉（SD-Ag）与创面愈合的关系：

4.3 EGF与创面愈合的关系

4.4 TGF-β与创面愈合的关系

第 5 章 结 论

第 6 章 展 望

参考文献

综述转基因治疗病理性瘢痕的研究进展

附录

致谢