9.4T离体型核磁共振频谱对亚硒酸纳诱导大鼠细胞凋亡时胆碱类物质变化的定量分析

摘要

目的：通过应用Bruker公司的Avance9.4T液态离体型高场强、高分辨率核磁共振频谱仪定量分析亚硒酸钠染毒后,大鼠肝脏急性损伤而发生细胞凋亡时,胆碱复合物的变化。
　　方法:20只雄性Wistar大鼠随机分成对照及实验两组,每组10只。实验组按20mmol/kg予以亚硒酸钠溶液腹腔注射染毒,对照组仅给予1ml/kg剂量的蒸馏水进行腹腔注射。所有大鼠均牺牲并取得肝脏。1H-MRS数据采集使用离体型9.4T高分辨率核磁共振频谱仪(Bruker Avance400 MHz)。所得频谱在频率域经XWINNMR(Bruker GmBH)软件初步处理后,再应用MestRe-c4.3软件进一步分析。H&E及TUNEL染色被使用来观察和确定肝脏细胞的变化。
　　结果:质量良好的高氯酸提纯大鼠肝组织物氢质子频谱被获得,常规的肝脏各种水溶性代谢物被探测到并被定位。通过软件积分及公式计算,总胆碱混合物的浓度在对照组是5.08+0.97mmol/L,实验组浓度3.81+1.16;游离胆碱浓度在对照组浓度为1.07+0.23 mmol/L,实验组为0.65+0.20。两组物质在两组间存在统计学意义(p值分别为P<0.05和p<0.01)。但是比较两组间的合成胆碱(主要含有磷酸胆碱及甘油磷酸胆碱)浓度却不存在统计学意义(p>0.05)。HE组织学检测,在100倍光镜下发现实验组的肝窦较对照组的增宽,400倍镜下可见实验组肝脏细胞形态不规则,边界不清,胞浆内可见体积增大,数目增多的类圆型的空泡形成,存留细胞质较浓,浓染的、存留的随意散布的染色质被观及,部分细胞核核仁消失,视野内未见明显的炎症反应。实验组及对照组发生凋亡的肝脏细胞均被TUNEL染色染成棕色而证实。
　　结论:高剂量、高浓度的亚硒酸钠溶液能导致大鼠肝脏损伤,在活体内引起肝细胞凋亡。离体型高分辨率核磁共振频谱能探测到各种不同的代谢物。在细胞凋亡早期,胆碱混合物的不同成分变化倾向不完全一致。

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第一章前言

1.1 细胞凋亡概论

1.2细胞凋亡的机制

1.3诱导凋亡的因素

1.4细胞凋亡研究方法

第二章 材料与方法

2.1实验材料：

2.2 仪器准备

2.3 动物模型制作

2.4 离体型氢质子频谱的测定

2.5 统计学分析

2.5 组织病理学检查

第三章 结果

第四章 讨论

4.1 肝脏细胞凋亡模型的制作

4.2 液态型离体高分辨率核磁共振频谱的使用注意问题

4.3 硒与细胞凋亡

4.4 离体氢质子核磁共振频谱，代谢物变化及细胞凋亡

第五章 结论与前景展望

参考文献

综述

致谢

攻读学位期间发表论文及参编著作

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