粤东地区喘息性疾病患儿中人类偏肺病毒的检出及其N蛋白编码基因的序列分析

摘要

目的：了解粤东地区喘息性疾病患儿的病原体中是否存在人类偏肺病毒(Human Metapneumovirus,HMPV)并分析其N蛋白编码基因的特征,同时探讨其感染的临床特征,为临床防治小儿喘息性疾病提供病原学基础实验依据。
　　材料与方法：
　　材料:选取2006年6月1日至2007年6月1日期间因喘息性疾病收住院治疗的2岁以下患儿(240例),采集其鼻咽吸取物或咽试子以供病毒学检测之用,并收集其年龄、性别、症状、体征等临床资料以供分析研究;同时采集同时期健康体检儿童(100例)的咽试子作为对照研究。
　　方法:1.应用多重PCR筛查呼吸道合胞病毒(RSV),腺病毒(ADV),流感病毒A型,B型(IVA,B),副流感病毒1型,3型(PIV1,3),鼻病毒(RV),博卡病毒( HBOV)。2.应用针对 HMPV的N蛋白基因的RT-PCR引物进行 HMPV基因片段检测,随机选取6份RT-PCR扩增阳性产物进行核苷酸序列测定。将所测序列与 GenBank中公布的基因序列进行比较分析,通过生物信息学方法对测定的人偏肺病毒基因片段进行进化分析,分析与其它地方病毒株的同源性。同时对HMPV N蛋白基因阳性病例的临床资料进行分析。
　　结果：
　　1.240份小儿喘息性疾病呼吸道标本中,病毒阳性101份(42％),单一病毒感染86份(85%),混合感染15例(占15%);检出病毒中以RSV占首位,41例(占41%),其次递减为PIV318例(占18%),RV17例(占17%), IVA16例(占16%),PIV113例(占13%), HMPV12例(占12%),ADV5例(占5%), HBOV4例(占4%),未检测到IVB。
　　2.240份标本中HMPV阳性率为5%(12/240),在其他病毒阴性标本中阳性率为7.9%(其中2例与其他病毒混合感染,分别与ADV和RV),其中3、4月份为发病高峰。阳性患儿均为年龄较小的患儿。6份 HMPV阳性标本目标基因部分核苷酸序列与 GenBank中公布的多株 HMPV N基因同源性为80.8%~98.4%。核苷酸序列基因进化树分析显示存在2种不同的基因型。12例HMPV阳性患儿均表现发热、咳嗽及喘息等临床症状;临床诊断为毛细支气管炎8例、喘息型肺炎4例。
　　3.100份健康体检儿童的呼吸道标本中均未检测到HMPV特异性基因片段;检出PIV3:1例,RSV:3例,RV:4例,其余病毒未检出。
　　结论：HMPV是粤东地区婴幼儿喘息性疾病的重要病毒性病原体之一;与常见呼吸道病毒感染所致疾病的临床表现相似;粤东地区儿童感染的HMPV株同时存在2种不同的基因型。

目录

封面

声明

中文摘要

英文摘要

英文缩写表

目录

第一章前言

参考文献

第二章 粤东地区喘息性疾病患儿中人类偏肺病毒的检出及其N蛋白编码基因的序列分析

1. 研究对象、材料与方法

1.1 研究对象

1.2 仪器和耗材

1.3 试剂

1.4 主要溶液配制

1.5 标本收集

1.6 标本提取核酸及行病毒核酸特异性片段扩增

1.7 核酸序列测定及对比分析

1．8 临床资料分析方法

2 结果

2.1 电泳结果

2.2 RT-PCR扩增产物核苷酸序列测定和比较分析

2.3 基因进化树分析

2.4 12例HMPV阳性患儿临床资料分析

2.5 HMPV流行规律见表 4

讨论

1．HMPV的生物学特点

2．HMPV感染的流行病学特点

2.1 发病率：

2.2 流行表现特点

2.3年龄分布

3．HMPV感染的临床特点

4．基因亚型与临床特征的关系

结论与展望

参考文献

文献综述

致谢

发表论文情况

作者个人简历