非对称性二甲基精氨酸对血管内皮纤溶系统的调节及其细胞内机制

摘要

背景：非对称性二甲基精氨酸（asymmetric dimethylarginine，ADMA ）是一种内源性一氧化氮合酶（NOS ）抑制剂，通过使一氧化氮（NO ）合成减少而引起内皮功能障碍。研究表明，ADMA 合成增加或分解减少与血栓性心血管疾病的发生发展密切相关，然而具体机制尚不明确。
　　 目的
　　 本研究将通过体外细胞培养，观察ADMA 对血管内皮细胞纤溶系统的主要调节因子即纤溶酶原激活物（tPA ）和纤溶酶原激活物抑制物-1（PAI-1 ）的影响，并观察各细胞内信号通路在ADMA 对tPA、PAI-1 调节过程中所起的作用，以阐明ADMA 对血管内皮纤溶系统的影响及探索其细胞内机制。
　　 方法
　　 （1 ）体外培养人脐静脉内皮细胞（HUVEC ）至3-5代，分别用单纯培养基、不同浓度ADMA（3、10、30 μ mol/L ）培养不同时间（6、24、48 小时）；（2 ）HUVEC分为单纯培养基对照组，ADMA 组，ι -arginine 组，MAPK（ERK1/2、JNK、p38 MAPK ）阻断剂组，NF-κ B阻断剂组，ι -arginine、MAPK 阻断剂、NF-κ B 阻断剂分别与ADMA 共同作用组。通过以上培养后，采用ELISA 法检测tPA和PAI-1的蛋白浓度以及NF-κ B DNA 结合活性；采用实时定量RT-PCR 法检测tPA和PAI-1的mRNA 水平；采用western blot 法检测MAPK 磷酸化水平。
　　 结果
　　 （1 ）ADMA 明显降低HUVEC tPA的蛋白水平，作用呈时间和浓度依赖性，其中30 μ mol/L ADMA 作用48 小时对tPA 蛋白的抑制作用最显著（对照组 109.01±4.15ng/ml vsADMA 组 86.76±5.95ng/ml, p<0.01 ）；30 μ mol/L ADMA 亦显著降低tPA mRNA 水平。
　　 （2 ）30 μ mol/L ADMA 使HUVEC PAI-1 蛋白水平明显增加，作用呈时间依赖性，其中30 μ mol/LADMA 作用48 小时对PAI-1 蛋白的促进作用最显著（对照组 2721.12±278.02ng/ml vs ADMA组 3435.78±22.33ng/ml, p<0.05 ）；30 μ mol/L ADMA 亦显著增加PAI - 1 mRNA 水平。
　　 （3 ）一氧化氮合成前体ι -arginine、p38 MAPK 阻断剂SB203580和NF-κ B 阻断剂PDTC 可以显著逆转30 μ mol/L ADMA 对HUVEC tPA、PAI-1的作用。
　　 （4 ）30 μ mol/L ADMA 明显促使HUVEC p38MAPK 快速磷酸化，并显著增加NF-κ B DNA 结合活性。
　　 结论
　　 ADMA 可能通过抑制一氧化氮合成而作用于p38 MAPK和NF-κ B 途径，从而破坏血管内皮纤溶系统活性的平衡，促进血栓的形成。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：缩略词表

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前 言

材料与方法

结 果

讨 论

结 论

参考文献

综述 ADMA 及纤溶系统在心血管疾病中的研究进展

致 谢

硕士生学习期间发表论文及学术活动

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