人CystatinC基因克隆、表达研究及其单克隆抗体和多克隆抗体的制备

摘要

目的：构建重组质粒并原核表达人Cystatin C，制备其鼠源性单克隆抗体和兔源性多克隆抗体并鉴定其生物学活性，分析Cystatin C 在食管癌和胃癌组织的表达分布情况。
　　 方法:从人的胃癌细胞AGS 上克隆扩增Cystatin C基因，构建pET44-Cystatin C 重组质粒，转化于大肠杆菌表达菌株BL21（DE3）获得重组人Cystatin C 蛋白。以复性后的纯化CystatinC 包涵体蛋白免疫BALB/c 小鼠和新西兰兔，从而制备鼠抗人Cystatin C 单克隆抗体和兔抗人Cystatin C 多克隆抗体。经Western Blot和ELISA 方法鉴定单克隆抗体及多克隆抗体的特异性。应用免疫组化技术和RT-PCR 等方法检测人Cystatin C 在胃癌食管癌组织表达情况。
　　 结果：成功构建了人Cystatin C 重组质粒并获得其纯化原核表达蛋白。免疫印迹实验和ELISA 实验提示所制备单克隆抗体和多克隆抗体对天然人Cystatin C 有较高的特异性。Cystatin C 蛋白在食管癌组织和胃癌组织表达升高相对于癌旁正常组织。其mRNA 亦在肿瘤组织中显示高表达。
　　 结论：成功构建Cystatin C 原核表达载体，所纯化蛋白有良好的抗原性。成功制备高效价的Cystatin C 单克隆抗体和多克隆抗体。Cystatin C 在食管癌胃癌组织中表达升高。

目录

文摘

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论文说明：缩略语

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第一章 前 言

第二章 材料和方法

第三章 实验结果

第四章 讨 论

第五章 结论

参考文献

综述 甲酰肽受体家族受体与恶性肿瘤

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