能量限制和高能量培养对HepG2细胞sirtuins家族表达的影响

摘要

目的:观察能量限制(calorie restriction,CR)、高能量[包括高糖(high glucose,HG)、高脂(high palmitate,HP)]培养基对HepG2细胞中sirtuins(包括SIRT1-7)家族表达的影响,为进一步研究该家族各因子的功能和其在能量代谢及相关代谢性疾病中的作用提供线索,并为寻找模拟CR药物提供依据。
　　方法:分别用高糖、低糖、高脂培养基培养HepG2细胞24小时,提取细胞内总mRNA和总蛋白质。利用RT-PCR技术,定量检测细胞内sirtuins家族各因子的mRNA转录水平。利用Western blot技术,定量检测细胞内sirtuins家族各因子的蛋白表达变化。
　　结果:
　　1.RT-PCR结果显示,与HG培养基相比,CR培养基培养的HepG2细胞内SIRT1、SIRT5和SIRT7的mRNA转录水平上升,SIRT3和SIRT4的mRNA转录水平下降,而SIRT6的mRNA转录水平没有变化。与HG培养基相比,HP培养基培养的HepG2细胞内SIRT1、SIRT5、SIRT6和SIRT7的mRNA转录水平上升,而SIRT3和SIRT4的mRNA的转录水平没有变化。与CR培养基相比,HP培养基培养的HepG2细胞内SIRT1、SIRT4和SIRT7的mRNA转录水平上升,SIRT5的mRNA转录水平下降,而SIRT3和SIRT6的mRNA转录水平没有变化。
　　2.Western blot结果显示,与HG培养基相比,CR培养基培养的HepG2细胞内SIRT1和SIRT7的蛋白表达量均上升,而SIRT2的蛋白表达量没有变化。与HG和CR培养基相比,HP培养基培养的HepG2细胞内SIRT1和SIRT7的蛋白表达量均上升,而SIRT2的表达量没有变化。本研究没有检测SIRT3、4、5、6蛋白水平。
　　结论:相对于HG,CR和HP培养的HepG2细胞中,sirtuins家族成员的表达量不同。从整体上看来,不仅是SIRT1,sirtuins家族成员可能共同参与CR在能量代谢方面的调节;另外,sirtuins家族成员可能参与肝糖和肝脂的调节,影响脂肪肝的形成。

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第一章 前言

1.1研究背景

1.2本项研究课题的基金来源及相关课题情况

1.3 本课题的研究意义

1.4 研究目标与研究内容

第二章 材料方法

2.1 实验材料

2.2 技术路线

2.3 试验方法

第三章：结果与分析

3.1 CR、HP对HepG2细胞sirtuins家族mRNA水平的影响

3.2 CR和HP对HepG2细胞sirtuins家族蛋白质表达水平的影响

第四章：讨论

参考文献

Sirtuins家族结构与功能简介

1. Sirtuins家族的结构、分类与细胞定位

2.Sirtuins家族的酶活性与生物学功能

参考文献

致谢

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