重氮衍生化试剂的合成及其在LC-MS/MS法测定前列腺素含量中的应用

摘要

前列腺素含量测定方法已经被大量报道，主要的方法包括HPLC，GC-MS，EIA，RIA， LC-MS等。其中不乏高灵敏度的方法，但在实际应用中发现很多缺点，如结构类似的前列腺素交叉反应，样品前处理太过复杂，分析时间过长以及回收率较低等。因而对前列腺素分析方法的优化始终是一个需要解决的重要问题。
　　通过比较已报道的前列腺素检测技术和样品前处理技术的优缺点，本项研究工作建立了柱前衍生化结合高效液相色谱-串联质谱测定生物样品中的前列腺素E2的分析方法。
　　本项研究设计并首次合成了适合质谱检测的具有高离子化效应的前列腺素衍生化试剂——4-吡啶重氮甲烷。其合成路线是4-(氨基甲基)吡啶经磺酰化、氧化，最后在强碱作用下分解制得。通过比较反应物不同配比、溶剂、反应温度以及时间等，探索出较好的合成条件和合成工艺。合成产物经核磁共振(NMR)、质谱(MS)和红外(IR)进行结构确认，与所设计的结构相符。
　　优化了生物样本的固相萃取方法，比较了不同洗脱剂的洗脱效果，确定了前列腺素与所合成的衍生化试剂4-吡啶重氮甲烷的化学反应条件等。最终所建立的分析方法如下：脑组织匀浆液经C18固相萃取小柱纯化，乙醚洗脱，40℃水浴与4-吡啶重氮甲烷反应10 min，高效液相色谱分离，质谱检测；液相色谱流动相为甲醇-10 mmol/L乙酸铵水溶液（75:25，v/v），流速0.2 ml/min；质谱采用电喷雾电离源，多离子反应监测方式进行检测；分析物荷质比为444→110。结果表明，前列腺素E2在0.65 pmol～7.10 pmol范围内与检测信号呈现出良好的线性关系, R2为0.996；方法检测限为0.21 pmol；相对回收率在70％以上，日内相对标准差小于6.8%，日间相对标准差小于9.8%。

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第1章 前言

第2章 重氮化合物的合成

2.1 试剂与仪器

2.2 实验步骤

2.3 结果与讨论

2.4 本章小结

第3章 LC-MS/MS测定SD大鼠脑组织中前列腺素的含量

3.1 材料与试剂

3.2 实验方法

3.3 结果与分析

3.4 本章结论

第4章 结论与展望

参考文献

第5章 文献综述

方法一 N-亚硝基化合物碱裂解法

方法二 重氮基转移法

方法三 腙脱氢氧化法

方法四 三氮烯裂解法

方法五 其他方法

参考文献

附 录

致谢