短刺小克银汉霉菌对山奈素的代谢转化

摘要

黄酮类化合物是在植物界中分布广泛的一类化合物,目前已有6000多种黄酮被鉴定,此类化合物具有清除自由基、抗氧化、抗癌、抗菌、抗过敏、抗炎症、抗病毒等多种生物活性及药理作用。山奈素(3,5,7-三羟基-4'-甲氧基黄酮)是一种生物黄酮类物质。对于山奈素在人体或动物体内代谢转化的相关报道比较少。小克银汉霉菌具有与人体内细胞色素P450相似的药物代谢酶,可模拟药物在人体内I相和II相代谢反应,具有易调控、底物浓度高、转化产物量大等优势,在药物体外代谢研究中应用广泛。本研究选用丝状真菌短刺小克银汉霉菌(Cunninghamella blakeleana AS 3.153)对山奈素进行代谢转化,制备代谢产物并初步鉴定产物化学结构。
　　本实验用无菌水冲洗菌丝来代替传统的接种环接种方式,获得大量菌株孢子,得到生长更良好的种子培养物,建立初步转化反应体系。建立高效液相色谱检测代谢产物的分析方法,分析转化产物含量。对反应体系相关因素对转化产率的影响进行探索和优化,建立一个稳定高效的转化体系。利用半制备型高效液相对转化产物进行分离制备。通过质谱(Mass Spectrum,MS)和核磁共振技术(Nuclear Magnetic Resonance,NMR)鉴定代谢产物化学结构。
　　初步鉴定山奈素的微生物代谢转化产物为山奈素葡萄糖结合产物。

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摘要

Abstract

英文缩略词表

前言

1药物代谢研究

2微生物代谢模型

3药物代谢与细胞色素P450酶

4小克银汉霉菌属

5山奈素的微生物转化

第一章材料

菌种

培养基

药品和试剂

1.4仪器设备

第二章实验方法

2.1菌株的复苏和培养

2.2转化菌株孢子和种子的制备

2.3基本转化系统

2.4分析样本的制备和HPLC分析条件

2.4.1分析样本制备

2.4.2液相色谱条件

2.5转化条件的优化

2.6山奈素转化产物的制备分离

2.6.1转化液的处理

2.6.2半制备HPLC条件

2.7山奈素转化产物的结构鉴定

2.8统计分析

第三章结果

3.1HPLC检测山奈素及其转化产物

3.2单因素条件的改变对山奈素转化产率的影响

3.2.1转化时间对代谢产物生成的影响

3.2.2山奈素浓度的影响

3.2.3种子培养物的接种量对山奈素转化率的影响

3.2.4转化液pH值对转化率的影响

3.3质谱结果

3.4NMR数据结果

3.5山奈素代谢转化路线图

第四章讨论

参考文献

综述

短刺小克银汉霉菌在药物代谢中的应用

参考文献

附录1

试剂配制

附录2

硕士期间发表的文章

致谢