Notch2激活HER2信号转导通路调控乳腺癌细胞SKBR3的迁徙和侵袭能力

摘要

背景与目的：Notch信号转导通路参与调控细胞增生、分化以及凋亡，而Notch信号转导通路的异常激活则与乳腺癌的发生、发展密切相关，并且与多条信号通路存在交互作用，有研究认为针对Notch信号转导通路的靶向治疗可沿多条途径发挥生物学功能，从而抑制乳腺癌的发生、发展。当前在乳腺癌治疗中，曲妥珠单抗治疗显著的改善了HER2过表达型乳腺癌患者的生存率，然而对曲妥珠单抗耐药，仍然是转移性乳腺癌面临的一个严重的临床问题，目前针对曲妥珠单抗耐药这一现象，有研究正在试图同时阻滞其他信号通路如Notch通路，期望能阐述曲妥珠单抗耐药机制。
　　基于上述背景，本研究旨在通过构建敲减及过表达Notch2ICD的乳腺癌细胞SKBR3，观察Notch2在HER2过表达型乳腺癌细胞SKBR3中的生物学作用，并分析Notch2与HER2信号转导通路相关性。
　　材料和方法：本研究通过siRNA、shRNA干扰HER2过表达型乳腺癌细胞SKBR3，建立瞬时敲减及稳定沉默Notch2ICD的细胞，与此同时，建立瞬时及稳定过表达Notch2I CD的SKBR3细胞，通过Western Blot验证Notch2的抑制或过表达效果，并观察这两个分子之间是否存在相互调节，通过相关功能实验，观察在乳腺癌癌细胞SKBR3细胞中干扰或过表达Notch2ICD时对其增殖、迁移及侵袭能力的影响。
　　结果：首先，我们敲减/过表达SKBR3细胞的Notch2ICD，并发现当敲减其Notch2ICD可以抑制p-HER2/p-AKT/p-ERK1/2通路蛋白水平的表达,而当过表达其Notch2ICD可以激活p-HER2/p-AKT/p-ERK1/2通路蛋白水平的表达，但是总HER2/AKT/ERK1/2则未见明显的改变;其次，在SKBR3细胞中使用γ-分泌酶抑制剂DAPT，可以抑制Notch2ICD与p-HER2/p-AKT/p-ERK1/2通路蛋白水平的表达，并明显抑制细胞增殖、迁移及侵袭能力；最后，我们在功能实验中发现，Notch2ICD可以促进细胞的增殖、迁移及侵袭力。
　　结论：在HER2过表达型乳腺癌细胞SKBR3中Notch2ICD能正向调控p-HER2/p-A KT/p-ERK1/2的表达，并能促进细胞增殖、迁移及侵袭能力。

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第一章 前言

第二章 实验设计

第三章 实验材料与方法

3.1 实验材料

3.2 实验方法

第四章 实验结果

4.1 乳腺癌细胞系中Notch2表达情况

4.2 敲减SKBR3细胞的Notch2后，可以抑制p-HER2及其下游表达

4.3 瞬时过表达SKBR3细胞的N2ICD后可以激活p-HER2及其下游表达

4.4 在SKBR3细胞中Notch2表达水平对其细胞生物学功能的影响

4.5 γ分泌酶抑制剂DAPT抑制 SKBR3细胞的p-HER2及其下游表达

4.6γ分泌酶抑制剂DAPT可以抑制 SKBR3细胞增殖及克隆形成能力

第五章 讨论

第六章 结论

参考文献

综述Notch信号通路与乳腺癌靶向治疗研究进展

致谢

论文发表情况

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